技术文章

BUNSEN本生小建议:冷冻管的使用要点

本生(天津)健康科技有限公司 >> 进入商铺

2023/11/3 9:03:35

  BUNSEN本生小建议:冷冻管的使用要点


  【概述】冷冻管的安全使用建议:

  1.使用低温恒温器储存样品时,严格要求低温恒温器应储存在液氮的气相中或冰箱中!如果将冷冻管保存在液氮中,液氮会以一定概率渗入冷冻管内,复苏时由于液氮气化,管内外压力不平衡,容易造成冷冻管爆裂,具有生物危害性。

  冷冻管的使用要点

  冷冻管的安全使用建议:

  1.使用低温恒温器储存样品时,严格要求低温恒温器应储存在液氮的气相中或冰箱中!如果将冷冻管保存在液氮中,液氮会以一定概率渗入冷冻管内,复苏时由于液氮气化,管内外压力不平衡,容易造成冷冻管爆裂,具有生物危害性。

  2.操作冷冻管复苏,全程使用安全防护设备。建议穿实验服,戴棉手套,在安全的实验台上操作。如有可能,请佩戴护目镜或防护面罩。请格外小心,因为夏天的室内温度会比冬天高。

  3.冷冻管厂家认为在冷冻保存细胞的储存过程中,冷冻管的冷冻温度需要均匀。冻结不均匀会导致冰塞的产生,冰塞会压制两侧液体的温度传递,进而产生危险的高压,损坏冷冻管。

  4.冷冻样本量不应超过冷冻储存管所需的工作体积。




  冷冻管厂家认为细胞的冷冻保存过程;

  1.用预热的PBS冲洗细胞。弃去PBS后,加入含有EDTA的胰蛋白酶消化液消化细胞(消化液可以薄薄地覆盖细胞表面,消化液的浓度要根据不同的细胞系进行调整)。

  2.在37度的消化细胞3-5分钟,不要过度消化。

  3.一旦细胞从底部分离出来,可以用含血清的培养基停止消化,用吸管轻轻吹气,细胞就可以重新悬浮。

  4.冷冻管厂家认为离心细胞再悬浮以沉淀细胞,弃去上清液,并用含血清的培养基再悬浮细胞沉淀。

  5.计数细胞(建议使用纽鲍尔室)。

  6.离心(500 g,5分钟)细胞再悬浮并丢弃上清液。用适当体积的含血清培养基悬浮细胞。

  7.将细胞重悬液与冷冻保存液(60%培养基,20%流式细胞仪,20%二甲基亚砜)以1,333,601的比例混合,然后转移到冷冻管中。冷冻试管中的细胞浓度应为15106个细胞/毫升。

  8.冷冻管厂家认为含有细胞的冷冻管应以1 K/min的冷却速度冷冻。上述要求可通过将冷冻管插入装有异丙醇的冷冻箱室中,并将其放入70的冰箱中来实现。如果冷冻溶液中有其他类型的样品,冷冻管应直接在20、70或液氮的气相中冷冻。为了保证每个样品的冷冻效果均匀,4毫升和5毫升的Cryo.s管需要在20冷冻过夜,然后转移到70或液氮的气体层。

  9.然后将冷冻储存管转移到液氮罐中。为了避免污染(如支原体)并考虑安全预防措施的要求,建议将Cryo.s冷冻管放置在液氮上方的气体层中,而不是液氮层中。

  冷冻管厂家认为细胞复苏过程:

  1.从液氮罐中取出冷冻管后,立即放入37的水浴中解冻,解冻时间约为1-2分钟。解冻时,需要不断摇动冷冻管,使其尽快融化。这一步解冻过程越快越好。

  2.冷冻管厂家认为将解冻后的细胞悬液转移到15 ml离心管中,需要立即加入一定量的含血清培养基进行混合。

  3.离心(500 g,5分钟)细胞再悬浮并丢弃上清液。用适当体积的含血清培养基重新悬浮细胞沉淀,然后将其分装到一个或多个细胞培养瓶中。

  4.请遵循细胞接种的推荐浓度。

  5.在接下来的12小时内,细胞需要在静止状态下培养。

  6.冷冻管厂家认为细胞更换可在24-48小时后进行。

  本生一直视质量控制为企业的生命,追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承:遵纪守法,严于律己,宽仁以待,敢于承担的企业精神作为标准,以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场,较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢,是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作,共创美好的未来。本生实验耗材


相关产品

猜你喜欢

当前客户在线交流已关闭
请电话联系他 :