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无血清培养基的选择

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2023/11/22 12:49:44

无血清培养基用于细胞培养,提供了更方便的纯化和下游加工处理以及更稳定的性能。无血清培养基的选择通常根据:(1)细胞或产物特异性; (2)细胞系对无血清培养基的适应性。


1、细胞或产物特异性

如果使用无血清培养基是为了促进一种特殊类型细胞的生长,那么这种选择性是由培养基的选择性决定的。例如,MCDB 153用于培养表皮角质细胞,LHC-9用于培养支气管上皮细胞,HITES用于培养小细胞肺癌细胞、MCDB130用于培养内皮细胞等。

如果只是为了不用血清培养连续细胞系,如CHO细胞或杂交瘤细胞,从而减少细胞产物中含有滤过性毒素或血清蛋白的可能,那么这种选择的范围就会更广,并有许多可供选择。然而,可能有必要筛选不同厂家的商品,以确保:①细胞生长;②产物结构可以持;③不需要长的适应期;④到货时间和价格可以接受。

当从创建者或细胞库获得一个细胞系的时候,他们会推荐合适的培养基,除非培养基无货或与其他成分不匹配才需更换培养基。可能的话,最好还是用创建者推荐的培养基,因为它可能是确保该细胞系保持其特异性的唯(空格)一途径。可参考本文的部分无血清培养基的适应性。


2、细胞系对无血清培养基的适应性

许多连续细胞系,如HeLa、CHO-K1或小鼠骨髓瘤可能可以适应缺乏血清的生长环境。适应过程常常是一个很长的选择周期,此间只有细胞群体中的少数被选择出来,因此在此选择过程中确保细胞系的性质不丧失是很重要的。如果是骨髓瘤细胞,其目的是用于制备杂交瘤;而如果是CHO细胞,则是用于转染实验,因此用无血清培养基的选择培养必须在融合和转染之前进行,使选择过程中丢失特性的危险性降到最(空格)低。

适应无血清培养基通常要经过几次连续的传代培养,在每次传代时或传代前,或根据适应的程度确定更换频率,使血清浓度逐渐降低。一旦细胞在某一血清浓度条件下形成稳定的增殖状态,就可用更低浓度的血清将细胞传代培养,直至稳定的生长增殖再次形成,而后再次稀释血清。

如果是悬浮培养,要计算活细胞的数量,根据活细胞的数量稀释细胞悬液,此时需要保持的最(空格)低细胞浓度要比正常传代培养所需的细胞浓度高一些。对于单层细胞培养,可在传代培养的前几天先降低培养基中的血清浓度,而后再用新的低浓度培养基进行传代培养。在适应过程中,可能我要在培养基中添加一些已知的因子来代替血清。

对于那些在无血清培养基中生长的增殖细胞,加入血清有可能抑制其生长。生长因子, 如TGF-B能够抑制上皮细胞的生长,EGF抑制A431细胞的生长。

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