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2023/11/24 12:33:59HA31016 磁珠法24孔质粒DNA小量抽提试剂盒(90-96mL)
可应用于对小量菌液进行质粒DNA抽提。试剂盒采用高性能纳米磁珠和特殊缓冲液系统。磁珠在一定条件下对质粒DNA具有极(空格)强的亲和力,当条件改变时可以可逆的释放质粒DNA,从而达到分离纯化质粒DNA的效果。整个操作过程简便、快速。本产品可最大限度的去除蛋白质等杂质,保证提取所得质粒DNA的纯度,所得质粒DNA产物可直接应用于酶切、测序、文库筛选、连接和转化等各种下游分子生物学实验。
本试剂盒可在EP管中进行手动法操作,或者与自动化核酸提取仪配合使用实现自动化高通量操作。
【试剂盒组成】
组分 | 规格 |
① P1 buffer | 8mL |
② P2 buffer | 8mL |
③ P3 buffer | 11mL |
④ 磁珠混悬液 | 5mL |
⑤ Binding buffer | 16.25mL |
⑥ Wash buffer | 10mL |
⑦ RNase A酶溶液 | 2uL |
【贮存条件】
组分①-⑥于2~8℃保存;组分⑦于-20℃保存;其他组分室温保存;
【实验步骤】
一、试剂准备
1. 将组分⑦RNase A酶溶液取出1.6uL加入组分①P1 buffer中,混匀,放置4℃保存备用;
2. 在组分⑤Binding buffer中加入9.75mL无水乙醇,混匀,室温保存备用;
3. 在组分⑥Wash buffer中加入40mL无水乙醇,混匀,室温保存备用。
二、操作步骤
1. 样品准备
a) 在24深孔板里过夜培养的4mL菌液,在离心机的水平转子上4000rpm离心15min,尽弃上清。
注意:孔之间不要污染。
b) 将300μL P1 Buffer加入24深孔板离心过后的菌体中,将24深孔板放置实验桌上,贴着桌面左右晃动,菌体充分悬浮。
注意:使用前请添加RNase 到P1 Buffer和在悬浮菌体时液体不要溅出杜绝污染。
c) 加300μL P2 Buffer到已悬浮好的菌液中,左右缓慢摇动混合均匀(不能剧烈震荡),进行裂解。
注意:操作时间不能超过5min(防止基因组污染)。
d) 再向裂解体系中加入420μL P3 Buffer,左右缓慢摇动混合均匀(不能剧烈震荡),出现絮状物沉淀。
e) 将裂解后的24深孔板放置在离心机的水平转子上4000rpm离心20min。
f) 取出离心后的24深孔板,一一对应的转移840uL上清至24 深孔板中。
注意:在转移过程中杜绝出现污染,样品并做好标记。
2. 质粒抽提
a) 准备清洗24孔深孔板,添加2 mL的Washbuffer(已添加乙醇)至新的24孔深孔板。
b) 准备洗脱24孔深孔板,添加100uL的无菌水至新的24孔深孔板。
c) 添加200uL磁珠混悬液至上述24深孔板中,完成后再加入1040uL的Binding buffer(已添加乙醇)至24孔深孔板中。
注意:添加磁珠前混匀磁珠混悬液。
d) 放置24孔磁力套至1号板位的24孔深孔板上,2号板位放置含有样品和磁珠24孔深孔板,3号和4号板位放置含有Wash buffer的24孔深孔板,5号板位放置100uL的超纯水的24孔深孔板。
e) 运行质粒抽提仪器,进入质粒抽提专用程序,运行完成后用移液器将样品转移至全裙边的96PCR板里,转移完成后标记项目号和质粒信息。
f) 使用分光光度计检测A260,并进行定量,测定的浓度记录于96PCR板上并登记excel表。
【注意事项】
1. 试剂时间长可能会出现沉淀,使用前轻轻摇晃混合均匀。也可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解,恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
2. 磁珠使用前充分摇匀。RNase保存在-20℃。试剂盒其他成分置于常温保存。
3. Buffer P1加入后一定要充分悬浮细菌,要保证看不到结块的菌,否则细菌不易被裂解,质粒产量会显著下降。
4. Buffer P2是否有沉淀。如有沉淀可用水浴(37℃)加热溶解,混匀后使用。
5. 基因组污染:Buffer P2和P3加入后轻轻摇晃,防止基因组断裂。