磁珠法24孔质粒DNA小量抽提试剂盒

HA31016 磁珠法24孔质粒DNA小量抽提试剂盒（90-96mL）

可应用于对小量菌液进行质粒DNA抽提。试剂盒采用高性能纳米磁珠和特殊缓冲液系统。磁珠在一定条件下对质粒DNA具有极(空格)强的亲和力，当条件改变时可以可逆的释放质粒DNA，从而达到分离纯化质粒DNA的效果。整个操作过程简便、快速。本产品可最大限度的去除蛋白质等杂质，保证提取所得质粒DNA的纯度，所得质粒DNA产物可直接应用于酶切、测序、文库筛选、连接和转化等各种下游分子生物学实验。

本试剂盒可在EP管中进行手动法操作，或者与自动化核酸提取仪配合使用实现自动化高通量操作。

【试剂盒组成】

【贮存条件】

组分①-⑥于2～8℃保存；组分⑦于-20℃保存；其他组分室温保存；

【实验步骤】

一、试剂准备

1. 将组分⑦RNase A酶溶液取出1.6uL加入组分①P1 buffer中，混匀，放置4℃保存备用；

2. 在组分⑤Binding buffer中加入9.75mL无水乙醇，混匀，室温保存备用；

3. 在组分⑥Wash buffer中加入40mL无水乙醇，混匀，室温保存备用。

二、操作步骤

1.  样品准备

a) 在24深孔板里过夜培养的4mL菌液，在离心机的水平转子上4000rpm离心15min，尽弃上清。

注意：孔之间不要污染。

b) 将300μL P1 Buffer加入24深孔板离心过后的菌体中，将24深孔板放置实验桌上，贴着桌面左右晃动，菌体充分悬浮。

注意：使用前请添加RNase 到P1 Buffer和在悬浮菌体时液体不要溅出杜绝污染。

c)  加300μL P2 Buffer到已悬浮好的菌液中，左右缓慢摇动混合均匀（不能剧烈震荡），进行裂解。

注意：操作时间不能超过5min（防止基因组污染）。

d) 再向裂解体系中加入420μL P3 Buffer，左右缓慢摇动混合均匀（不能剧烈震荡），出现絮状物沉淀。

e) 将裂解后的24深孔板放置在离心机的水平转子上4000rpm离心20min。

f) 取出离心后的24深孔板，一一对应的转移840uL上清至24 深孔板中。

注意：在转移过程中杜绝出现污染，样品并做好标记。

2. 质粒抽提

a) 准备清洗24孔深孔板，添加2 mL的Washbuffer(已添加乙醇)至新的24孔深孔板。

b) 准备洗脱24孔深孔板，添加100uL的无菌水至新的24孔深孔板。

c) 添加200uL磁珠混悬液至上述24深孔板中，完成后再加入1040uL的Binding buffer(已添加乙醇)至24孔深孔板中。

注意：添加磁珠前混匀磁珠混悬液。

d) 放置24孔磁力套至1号板位的24孔深孔板上，2号板位放置含有样品和磁珠24孔深孔板，3号和4号板位放置含有Wash buffer的24孔深孔板，5号板位放置100uL的超纯水的24孔深孔板。

e) 运行质粒抽提仪器，进入质粒抽提专用程序，运行完成后用移液器将样品转移至全裙边的96PCR板里，转移完成后标记项目号和质粒信息。

f) 使用分光光度计检测A260，并进行定量，测定的浓度记录于96PCR板上并登记excel表。

【注意事项】

1.  试剂时间长可能会出现沉淀，使用前轻轻摇晃混合均匀。也可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。

2.  磁珠使用前充分摇匀。RNase保存在-20℃。试剂盒其他成分置于常温保存。

3.  Buffer P1加入后一定要充分悬浮细菌，要保证看不到结块的菌，否则细菌不易被裂解，质粒产量会显著下降。

4.  Buffer P2是否有沉淀。如有沉淀可用水浴（37℃）加热溶解，混匀后使用。

5.  基因组污染：Buffer P2和P3加入后轻轻摇晃，防止基因组断裂。