一，重组C因子法原理
PyroGene™重组因子C试剂盒是一种不含动物制品的LAL替代方案，FDA已许可将其作为一种替代方法。它基于一种重组产生的C因子(rFC)，C因子是马蹄蟹凝血级联反应中的第一个组成部分。 它由内毒素结合激活。然后，产生的活性成分发挥作用，裂解合成底物，释放荧光。反应在96孔板中操作，使用380/440nm的激发/发射波长，在时间零点和一小时孵育后，在荧光酶标仪中以37°C ± 1°C孵育的时间零点和一小时后，分别测量荧光。
比较细菌内毒素检测试剂盒中的扩增方法
对一小时读数和零时读数之间的差 (∆RFU)进行校正，用于阴性对照 ∆RFU荧光。净荧光的对数与内毒素浓度的对数成正比，并且在0.005-5.0 EU/ml范围内呈线性。样品中内毒素的计算与标准曲线有关。
三，重组C因子法检测所需主要设备、材料
试剂
– rFC酶溶液
– 荧光底物
– rFC定缓冲液
– 内毒素工作标准品 (CSE)
– LAL 试剂检查用水（即LRW）(# W50-640, W50-100, W50-500)
器具
– 玻璃稀释管(# N207)
– 独立包装的血清吸管（选购）
– 标签
– 96-微孔板 (# 25-340)
– 试剂槽(# 00190035)
请使用经内毒素试验验证合格的无热原器具。
设备和软件
– 八道移液器
– 孵育荧光酶标仪
– WinKQCL™软件
– 移液器
– 计时器
– 漩涡混合器
三，操作步骤
注意事项
– 使用匹配的试剂
– 使用玻璃管制作内毒素稀释液[不推荐使用塑料管]
– 遵循所有关于内毒素漩涡震荡次数的建议
– 使用经内毒素试验验证合格的无热原器具
– 使用前，先使试剂温度与室温保持相同
– 不要旋转工作试剂
– 将试剂放入96-微孔板的孔中时，避免产生气泡
– 不要污染样品、标准品、LRW 和器具
– 应正确安装、验证并维护设备仪器
玮驰相关产品
设备和软件
| 品牌 | 货号 | 说明 |
| Lonza | 25-345S | PyroWave™ XM荧光酶标仪 |
| Lonza | 25-611 | 符合FDA PART 11认证的软件WinKQCL, 也包含一个仪器许可证 |
重组因子C终点荧光试剂盒
| 品牌 | 货号 | 名称 | 规格 | 灵敏度(EU/ml) |
| Lonza | 50-658U | PyroGene™ 重组因子C终点荧光试剂盒 | 192次测试 | 0.005至5 |
| Lonza | 50-658NV | PyroGene™ 重组因子C终点荧光试剂盒 | 2880次测试 | 0.005至5 |
无热原试管
| 品牌 | 货号 | 名称 | 规格 |
| Lonza | N207 | 无热原试管 | 30/铝箔包 |
| Lonza | N201 | 无热原试管 | 50/箱 |
| Lonza | N205 | 无热原试管 | 50/铝箔包 |
无热原96孔板
| 品牌 | 货号 | 名称 | 规格 |
| Lonza | 25-340 | 无热原96孔板 | 内毒素测试<0.0005EU/孔，50/箱 |
试剂槽
| 品牌 | 货号 | 名称 | 规格 |
| Lonza | 190035 | LAL试剂槽 | <0.005EU/ml，10/包 |
无热原吸头
| 品牌 | 货号 | 名称 | 规格 |
| Lonza | BE25-415 | Eppendorf® 2-200μl Biopur™ 移液管吸头 | <0.001 EU/mL，5个托盘/pkg;96个吸头/托盘 |
| Lonza | BE25-417 | Eppendorf® 50-1000μl Biopur™ 移液管吸头 | <0.001 EU/mL，5个托盘/pkg;96个吸头/托盘 |
