抗体特异性验证方法有什么？

抗体特异性验证方法有什么？

抗体特异性从始至终备受重视，那么你知道抗体特异性验证方法有什么吗？让我们一起来看看吧！

一、RNA 干扰(RNA Interference)

RNA 干扰是与靶基因序列同源的双链 RNA(dsRNA)所诱导的一种特异性基因沉默，可以迅速阻断基 因活性。siRNA(Small Interfering RNA)  是一种小 RNA 分子(大约 21-25 核苷酸) ，siRNA 只降解与其序列互补配对的 mRNA， 其调控的机制是通过互补配对来降低相应靶位基因的表达，所以是一种典型的负调控机制。

在抗体特异性检测中，可以通过这种“基因敲降”的方法来验证目标蛋白表达量降低时，抗体与抗原发生结合产生的目的条带 是否会消除或降低。

二、基因敲除(Knock Out，KO)

基因敲除是一种遗传工程技术，敲除目的基因，产生目的蛋白不表达的阴性样品，从而使部分功能丧失， 并可进一步对生物体造成影响，进而推测出该基因的生物学功能。在抗体特异性检测中，可以通过这种“基因敲除”方法来验证目标蛋白缺乏时，抗体是否会发生非特异性结合。

三、天然阴性样本

天然阴性样本是指部分蛋白质存在组织、细胞特异性，可以利用天然不表达的细胞或组织作为阴性对照：如 CD20 不在 T 细胞中表达，PAX8 不 在 Hela 细胞中表达。此外，某些蛋白质在特定的生理条件下才表达，或降低表达，或表达量的改变，也可以作为特异性的参考依据。

四、酶法检测

适用于修饰蛋白的抗体验证。蛋白质通常会有一些修饰形式，如磷酸化，糖基化等，可以通过检测修饰前后 western blot 条带的变化来判断抗体的特异性， 这时候就需要添加相应的酶来去除这些修饰形式，如磷酸酶，糖苷酶等。酶法检测是验证抗体特异性的较为迅速简便的方法。

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