难消化性糊精粉末的分析 (LB-802.5)

   膳食纤维可用于预防血脂异常、便秘和肥胖。 难消化性糊精被认为是 1991 年在日本推出的特定保健用食品（Tokuho）中的一种成分。分析含有大量低分子量水溶性膳食纤维（如难消化性糊精）的样品，使用酵素-高效液相色谱法。特定保健用食品标准记载了难消化性糊精的定量方法，即对一系列前处理样品进行 HPLC 分析，并测定膳食纤维部分与甘油（内标物）的峰面积之比。以下是我们对市售的难消化性糊精粉末进行了前处理，并参照 特定保健用食品标准中描述的步骤，使用水溶性SEC用色谱柱OHpak LB-802.5分析的应用实例。 另外，前处理方法与特定保健用食品标准中描述的方法有部分不同。

*根据《食品标签标准》，低分子量水溶性膳食纤维是指色谱图中保留时间早于红色虚线位置（麦芽三糖的洗脱位置）的纤维。

前处理方法

1. 1.将 1 g粉末样品溶解在50 mL 0.08 M 磷酸盐缓冲液（pH 值 6.0）中。

2. 2.加入 0.2 mL α-淀粉酶，确认 pH 为6.0 ± 0.5。 *该样品的 pH 值为 6.3。

3. 3.放入沸水浴中，在 90 ℃ 下振荡反应 30 分钟。

4. 4.冷却后，加入 0.2 mL 蛋白酶和淀粉葡萄糖苷酶溶液，确认 pH 为6.0 ± 0.5。 *该样品的 pH 值为 6.3。

5. 5.在 60 ℃ 下振荡反应 30 分钟。

6. 6.放入沸水浴中，在 100 ℃ 下加热 10 分钟。

7. 7.冷却后，加入 5 mL用水稀释 10 倍的甘油。

8. 8.用水定容至100 mL，制成酶处理溶液。

9. 9.将 50 mL 酶处理液以 50 mL/h 的速度通过*离子交换树脂。
      *Amberlite™ IRA-67 和 Amberlite™ 200CT（杜邦）各25 mL 混合。

10. 10.将约 150 mL 水通过第9步的离子交换树脂 (总流出液：200 mL）。

11. 11.在旋转蒸发仪中浓缩。

12. 12.加水定容至 20 mL 。

13. 13.用 0.45 µm 膜过滤器过滤，作为HPLC 样品。

Sample: 20 μL
Pretreated indigestible dextrin powder

1. 1.Dietary fiber fraction

2. 2.Glucose

3. 3.Glycerin (Internal standard)