2022年7月20日，《Nature》期刊同时刊登四篇文章，均使用到了Incucyte® 实时活细胞分析系统。
而在今年10月，这一成就再次上演，《Nature》期刊又同时刊登了三篇使用Incucyte® 的文章。这又一次证明Incucyte® 以其简单的实验设置和分析流程、可直接放置在培养箱中进行拍摄的设计、以及精准计算各种细胞指标的能力，深受众多用户的青睐，在体外细胞水平的实验中有着广泛应用。
这三篇《Nature》文章均引起了不小轰动，它们又是如何应用Incucyte® 的呢？
不可成药靶点的抑制剂！[1]
艾伯维联合开发了一种PTPN2/PTPN1抑制剂口服药，其相关实验结果已发布于顶级学术期刊《Nature》中。蛋白酪氨酸磷酸酶PTPN2和PTPN1是炎症的中枢调节因子。然而，磷酸酶是具有挑战性的药物靶点，被认为是无法成药的。艾伯维联合开发了一款潜在“first-in-class”的口服PTPN2/PTPN1抑制剂ABBV-CLS-484（AC484），在PD-1阻断耐药的小鼠模型中引发强大的抗肿瘤免疫反应。该抑制剂目前已进入Ⅰ期临床试验。研究人员表示：ABBV-CLS-484是首个进入癌症免疫疗法临床评估的活性位点磷酸酶抑制剂，并可能为针对这类重要酶的其他治疗方法铺平道路。
在研发实验中，Incucyte® 实时活细胞分析仪也是大显身手，在体外细胞实验和共培养杀伤实验均有广泛应用。
图1. a) 添加或不添加IFNγ(10 ng/ml)的AC484对B16肿瘤细胞生长抑制的百分比；
b) AC484 (1µM) 和IFNγ (10 ng/mL) 对WT和PTPN2/N1缺失B16细胞体外生长曲线的影响。作者比较了PTPN2/N1抑制对基因缺失的影响，发现AC484在体外剂量依赖性地增强了IFNγ驱动的生长停滞，与PTPN2/N1缺失的B16肿瘤细胞类似。
轻轻松松做细胞动力学增殖曲线，拍摄频率随心所欲，想几分钟拍一次都行！
异种器官移植不是梦![2]
生物科技公司eGenesis在顶尖杂志《Nature》发布了一项突破性的研究成果，该研究显示：接收其所开发人源化猪肾移植后的食蟹猴存活超过2年！用于食蟹猴（OWM的一种）移植的猪肾总共经过69处基因组编辑，包含敲除了被认为会引起免疫排斥的三个聚糖抗原（3KO），过表达7种人类转基因（7TG）以减少灵长类免疫系统的排斥反应，同时让猪逆转录病毒基因的所有拷贝失活（RI）。实验结果发现，携带人类转基因的供体肾脏移植到食蟹猴中后可显著延长存活时间。与接受仅敲除三聚糖抗原猪肾的对照组（3KO±RI）相比，那些接受含有敲除和人类转基因猪肾移植的食蟹猴（3KO.7TG±RI）存活时间延长了七倍多——两组的中位存活时间分别为24天和176天。在同时接受临床相关免疫移植方案、属于3KO.7TG±RI组中的一只食蟹猴，存活时间甚至超过2年（758天）。
在进行体外功能分析补体依赖性细胞毒性试验实验中，作者使用Incucyte® 实时活细胞分析系统和软件计算Cytotox Red阳性细胞的数量。补体依赖细胞毒性是通过将Cytotox Red阳性细胞的数量归一化到细胞总数来计算的。
图2. 当与人或食蟹猴血清孵育45分钟时，WT内皮细胞被溶解，而3KO（橙色组）修饰几乎完全消除了人血清的补体依赖性细胞毒性，但没有消除食蟹猴血清，说明食蟹猴血清具有较强的抗猪细胞毒活性；当孵育时间延长至15h时，3KO修饰不足以完全保护细胞，即细胞被人血清杀死；3KO.7TG±RI（蓝色组）对人和食蟹猴血清细胞毒性均有保护作用，超过3KO的保护作用。
即便是采用终点法，Incucyte® 强大的分析软件同样能够大显身手，其生成的图片作为原始数据，清晰度完全足够。
潜在延缓衰老的机制![3]
Tait团队和Passos团队在顶级期刊《Nature》上发表了一项重磅研究成果，他们的研究发现线粒体外膜通透（MOMP）在细胞衰老时出现，并通过mtDNA激活cGAS-STING通路驱动了SASP(一种衰老相关的分泌表型)的产生。这一发现为细胞凋亡和衰老之间的联系提供了新的理解，并展示了潜在的延缓衰老策略。
研究人员发现，在衰老细胞中，多数线粒体处于过度融合的状态，只有少量线粒体发生破裂，产生miMOMP现象。miMOMP足以通过BAX/BAK的活化促使细胞质中出现更高的线粒体DNA分泌量，后者激活SASP的主要调控通路cGAS-STING，最终驱动SASP的发生。因此，研究人员尝试使用了小分子BAX抑制剂BAI1处理衰老细胞，以便抑制miMOMP，结果显示不仅在体外细胞实验中能够有效避免线粒体渗漏和SASP分子释放，在动物实验中，还让老年小鼠变得更年轻。在细胞实验中，研究人员使用Incucyte® 系统上使用细胞死活绿色荧光染料检测了不同条件下细胞死亡情况。
图3. BAI1处理在BAK敲除的细胞中BH-3模拟诱导的细胞死亡有保护作用，但在BAX敲除的细胞中没有，这与BAX特异性抑制作用一致（a）；用BAI1处理的衰老细胞也更能抵抗ABT263诱导的细胞死亡（g）。
即使实验组数量众多，也不成问题；6个板位兼容各种孔板，轻松搞定各种实验需求。
总而言之，上述研究体现出Incucyte® 实时活细胞成像分析系统的独特优势：
自动检测，提升实验效率
满足密集时间点以及长时间监测的需求，一次实验得到大量数据，解放人力，是从事细胞研究不可或缺的工具；
分析简便，提升数据质量
软件采集及分析模块配合荧光检测试剂，得到高度可靠的数据。实时检测整个细胞死亡/凋亡曲线，在细胞死亡状况较为接近的情况下，仍然在大量数据的前提下得到确切的结论；
6板位设计，多实验同步开展
内设6个板位，可以分别独立设置检测程序，满足6组不同实验或多人实验同时检测的需求。
还是那句话，只要放好您的细胞，其他的就交给Incucyte® 吧！
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-参考文献-
[1] Baumgartner, C.K., Ebrahimi-Nik, H., Iracheta-Vellve, A. et al. The PTPN2/PTPN1 inhibitor ABBV-CLS-484 unleashes potent anti-tumour immunity. Nature 622, 850–862 (2023).
[2] Anand, R.P., Layer, J.V., Heja, D. et al. Design and testing of a humanized porcine donor for xenotransplantation. Nature 622, 393–401 (2023)
[3] Victorelli, S., Salmonowicz, H., Chapman, J. et al. Apoptotic stress causes mtDNA release during senescence and drives the SASP. Nature 622, 627–636 (2023)
