一、细胞培养程序:
A、目的:将培养于培养箱中的细胞进行继代培养,或是因应实验需求进行分盘。
B、操作程序:
1、实行注意事项 H 中操作前的准备步骤。
2、将 Flask 自培养箱中取出,于操作台中用帮浦及巴斯特滴管抽去所有溶液。
3、用滴管吸取 10 ml PBS 溶液,加入至 Flask 中,以轻微摇晃的方式润洗细胞层,之后用相同一支滴管将 PBS 溶液吸取至一干净烧杯回收废溶液。
4、拿取一只新滴管,重复步骤 3。(步骤3、4是为去除原有培养基当中的 FBS,以免 FBS 中和酵素的作用,使细胞壁上的黏附蛋白质无法被酵素分解,细胞会无法悬浮起来,无法取出细胞)
5、用一滴管吸取 2 ml 酵素溶液,加入至 Flask 当中,放入培养箱中培养 5-10分钟。
6、用滴管加入 8 ml 新鲜培养基于 Flask 中,混合均匀后可用同一支滴管取出所有溶液,置于一干净离心管。
7、将离心管放置于离心机中,以 1500 rpm 离心 5 分钟。
8、于生物操作柜中,以帮浦与巴斯特滴管抽去上方残余溶液。
9、此时视分盘状况需要,加入适量的培养基,以滴管吸放的方式将沉淀的细胞重新悬浮起来,将全数溶液平均分配至分盘的容器当中。(需计算此时在每个容器当中的量有多少)
10、补充培养基至容器的合适容量。(注意事项 B)
11、放入培养箱中继续培养或是进行实验。至此完成细胞培养的程序。