1型糖尿病（T1DM）的发病率正以3%/年的速度逐年增加，因此未来十年T1DM的全球发病率可能翻倍(4)。
靶向胰岛细胞抗原的自身抗体是T1DM的标志，包括谷氨酸脱羧酶自身抗体(GADA)、胰岛素自身抗体(IAA)、蛋白酪氨酸磷酸酶自身抗体(IA-2A)和锌转运蛋白8自身抗体 (ZnT8A)(7,8)。这些自身抗体可在T1DM出现临床症状前出现，可早在婴儿期血液中被检测到，并在此后持续多年存在(1)。
自身抗体在诊断T1DM方面具有很高的临床应用价值。在高危人群和一般人群中开展自身抗体检测使预测T1DM成为可能，患者的一级亲属作为高危人群，往往有更高的T1DM罹患风险(11)。T1DM自身抗体在不同种族群体中的检出率不同，这可能表明不同人群中自身免疫的作用不同，检测自身抗体有助于了解T1DM的病因学机制。斯里兰卡缺乏国内儿童人群中，确诊T1DM时的糖尿病自身抗体的检出率数据，也缺乏高危人群中的糖尿病自身抗体的检出数据(9)。
本研究旨在通过一种新的3-Screen筛查策略评估斯里兰卡T1DM儿童及其健康兄弟姐妹（简称健康同胞，高危人群）的自身抗体的检出率。
入组情况
在斯里兰卡科伦坡卡伯雷拉儿童医院招募儿童受试者，受试者的入组流程详见图1，最终纳入235名T1DM儿童和252名高危人群。其临床特征详见表1。
表1 T1DM儿童及高危人群（健康兄弟姐妹）临床特征
图1 受试者入组流程。
检测方法
血清样本通过干冰运输到英国RSR Limited 公司FIRS实验室检测。样本检测的详细信息见下表所示。
结果
1. T1DM儿童糖尿病自身抗体的分布
T1DM儿童中186/235(79.1%)为3-Screen阳性，其中66.8%受试者抗体水平≥20 u/mL。在所有186例3-Screen阳性受试者中，单项抗体检测均证实患者至少有一种自身抗体阳性：GADA 174/235 (74%），其中59.1%受试者抗体水平≥20 u/mL ；IA-2A 73/235(31.1%），其中22.6%受试者抗体水平≥30 u/mL；ZnT8A 91/235(38.7%），其中29.8%受试者抗体水平≥40 u/mL。
在3-Screen阳性受试者中发现，多项自身抗体阳性患者比例很高——18.3%的受试者中发现3种抗体，26.8%的受试者中发现2种抗体（图2）。
在49例3-Screen阴性T1DM受试者中，3例样本在单项检测中呈低浓度阳性，GADA、IA-2A、ZnT8A单项阳性各1例。因此，共有46例自身抗体阴性的T1DM受试者。此外，4名自身抗体阴性（3 screen和单项均阴性）的T1DM儿童有自身抗体阳性健康兄弟姐妹，抗体分布表现为2名GADA阳性，1名IA-2A阳性，1名IAA阳性。
在189/235(80.4%)的T1DM受试者中发现胰岛素抗体，由于患者在采血前接受了胰岛素治疗，这些抗体可能是自身抗体和抗外源性胰岛素抗体的混合。
表2 T1DM患者自身抗体患病率与性别、抽样年龄和发病年龄的关系。
图2 T1DM患儿相关自身抗体的分布。三种T1DM相关自身抗体合并的患儿占18.3%，两种T1DM相关抗体合并的患儿占26.8% (GADA + ZnT8A 16.6%; GADA +IA-2A 8.5%; ZnT8A +IA-2A 1.7%)。
2.T1DM患儿健康兄弟姐妹中糖尿病自身抗体的检出率
健康兄弟姐妹受试者中16/252（6.3%）为3-Screen阳性，所有16例患者在单一抗体检测项目中至少有一种自身抗体阳性，其中GADA检出率15/232(6%); IA-2A检出率6/252(2.4%)；ZnT8A检出率4/252(1.6%)，IAA检出率为2.4%(6/252)。此时IAA为内源性胰岛素的自身抗体。
对4名有两种T1DM自身抗体的健康兄弟姐妹进行随访。一名患者出现糖耐量受损(OGTT后2小时血糖9.3 mmol /l)，并给予胰岛素治疗。此外，一名只有GADA阳性的健康兄弟姐妹，在招募的四年后新冠感染住院后患上了T1DM。
3. 甲状腺自身抗体的检出率
在9例合并临床甲状腺功能减退的T1DM患者中，TPOAb和TgAb占多数(分别为100%和78%)。T1DM患儿队列中检测到1例TRAb (3.3 IU/L，同时患有支气管哮喘和甲状腺功能减退)，健康兄弟姐妹队列中检测到1例TRAb (1.2 IU/L，同时患有支气管哮喘)。
表3 T1DM受试者和其兄弟姐妹甲状腺自身抗体的患病率
讨论
本研究使用一种新面世的糖尿病自身抗体筛查3-Screen试剂盒测试斯里兰卡儿童中T1DM相关自身抗体，结果与近期综述中引用的亚洲国家现有疾病的检出率数据一致（79%）(10)。所有3-Screen阳性的T1DM儿童在单独自身抗体特异性测定中均呈一种或多种抗体阳性，这表明3-Screen和单项抗体测定结果之间存在高度相关性。
3-Screen抗体检测是儿童自免糖尿病筛查的有效工具。最近对巴伐利亚儿童的一项研究中，132名新诊断的T1DM儿童中98%为3-Screen筛查阳性；而在瑞典的一项研究中，这一比例为91%(20,21)。
本研究中46例T1DM患者自身抗体阴性。T1DM自身抗体阴性的原因可能包括MODY、较长的病程、错误的2型糖尿病分类、共存疾病、自身抗体逆转、种族差异(尤其是亚洲人群)、抗体产生缺陷、免疫失调等(22,23)。我们排除了临床疑似MODY的受试者。然而，由于全球和当地的情况，无法筛查HNF 1、HNF4α、HNF 4β或葡萄糖激酶基因突变(24)。
本研究中，健康兄弟姐妹中3-Screen阳性检出率为6.3%，其中4/252(1.6%)有两种与T1DM相关的自身抗体，这使得10年内患T1DM的风险高达70%(25)。其中一名受试者出现糖耐量受损，正在使用胰岛素。另一名随访4年也出现了T1DM。本研究与之前报道的儿童筛查结果接近，DAISY、BABYDIAB、BABYDIET和DIPP研究中13377名具有糖尿病遗传风险的合并受试者中，7.9%出现多重自身抗体阳性和3.5%出现单一自身抗体阳性(26)。TEDDY研究中，7777名儿童中有9.5%出现一种或多种糖尿病自身抗体，5.5%出现两种或两种以上糖尿病自身抗体(25)。此外，在波兰的一项研究中，1065名患者兄弟姐妹中有8.0%在3-Screen中呈阳性，其中5.6%有多种自身抗体(27)。因此，3-Screen是检测斯里兰卡高危儿童T1DM相关自身抗体以评估未来T1DM风险的有效工具。
结论
本研究证明3-Screen可以作为T1DM患者和高危人群中T1DM相关自身抗体的筛查工具。本研究为未来斯里兰卡人群自身抗体检出率和T1DM预测模型的研究奠定了基础。
参考文献：Atapattu N, Amoroso M, Powell M, de Silva DGH, de Silva KSH, Furmaniak J, Rees Smith B, Premawardhana LD. The prevalence of diabetes and thyroid related autoantibodies in Sri Lankan children with type 1 diabetes and their unaffected siblings - The utility of a new screening assay. Front Endocrinol (Lausanne). 2023 Feb 6;14:1028285. doi: 10.3389/fendo.2023.1028285. PMID: 36814577; PMCID: PMC9939822.
