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应用图像细胞仪促进生物制品和rAAV生产的细胞系开发
基于生物制品和AAV的基因疗法在疾病治疗方面获得了更多的市场额。然而,开发一种强大而高效的哺乳动物细胞系来生产它们是具有挑战性的,并且通常需要广泛的细胞表征。历史,流式细胞仪用于这些基于细胞的测定。然而,流式细胞仪相对昂贵,并且需要大量的操作和维护培训。最近,随着计算能力和高质量相机传感器的提高,基于图像的细胞术得到了创新,为细胞系工艺开发提供了一种精确且具有成本效益的替代方案。在这项工作中,我们描述了一种细胞系开发工作流程,该工作流程结合了基于图像的细胞仪,即Countstar Rigel,用于分别使用表达抗体和rAAV载体的CHO和HEK293细胞进行转染效率评估和稳定池评估。在两个案例研究中,我们证明:
Countstar Rigel提供了与流式细胞术相似的检测精度。
基于Countstar Rigel的池评估可以帮助确定单细胞克隆(SCC)所需的组。
Countstar Rigel结合的细胞系开发平台实现了2.5g/L mAb滴度。
我们还讨论了使用Countstar作为基于rAAV DoE的优化目标的另一层的可能性。
有关更多详细信息,请下载PDF文件。
应用Countstar FL图像细胞仪进行细胞周期定量分析
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介绍
在细胞周期分析中,测量DNA结合染料的掺入已经是确定细胞DNA含量的认方法。碘化丙啶(PI)是一种常用于测量细胞周期的核染色染料。在细胞分裂中,含有增加量的DNA的细胞显示出成比例增加的荧光。荧光强度的差异用于确定细胞周期每个阶段的DNA含量。Countstar Rigel系统(图1)是一种智能、直观、多功能的细胞分析仪器,可以在细胞周期分析中获得精确的数据,并可以通过细胞活力测定检测细胞毒性。易于使用的自动化程序可指导您通过成像和数据采集完成细胞测定。
应用Countstar FL图像细胞仪研究细胞毒性
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介绍
细胞毒性测定在许多实验室中被常规用于各种目的,从评估细胞培养物的健康到评估一组化合物的毒性。用于这些测定的测量工具需要可靠、易于使用且相对快速。Countstar Rigel系统(图1)是一种智能、直观的细胞分析仪器,可简化各种细胞测定,包括转染、凋亡、细胞表面标记、细胞活力和细胞周期评估。该系统提供了稳健的荧光定量结果。易于使用的自动化程序可指导您完成细胞测定形式的成像和数据采集。
使用293和碘化丙啶的GFP转染效率测定
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介绍
绿色荧光蛋白(GFP)是一种由238个氨基酸残基(26.9kDa)组成的蛋白质,当暴露于蓝色至紫外线范围的光时表现出明亮的绿色荧光。在细胞和分子生物学中,GFP基因经常被用作表达的报告基因。在修饰的形式中,它已被用于制造生物传感器,并且已经创造了许多表达GFP的动物,作为基因可以在给定的生物体中表达的概念证明,或者在选定的器官、细胞或兴趣中表达。GFP可以通过转基因技术引入动物或其他物种,并保留在它们及其后代的基因组中。
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