超临界流体色谱柱的原理主要基于超临界流体的特性。在超临界状态下，流体既具有气体的低粘度和高扩散速率，又具有液体的高溶解度和较高的物质传质能力。这使得超临界流体对样品分离具有很好的能力。其填料是一种微孔物质，具有大的比表面积和较高的吸附能力。填料的选择对分离效果有很大影响。例如，聚碳酸酯填料广泛应用于有机化合物的分离，而二氧化硅填料适用于天然产物的分离。填料表面可通过化学修饰或嵌段聚合等方法进行改性，以增强对特定样品的亲、疏水性。
其操作原理与传统的液相色谱柱类似。将待测试的样品溶解在超临界流体中，形成流动相。样品在超临界流体中的溶解度与分配系数决定了其在柱中的运移速度。然后，将流动相以一定流速通过填充在色谱柱中的填料。样品分子在填料表面发生吸附/解吸作用，由于吸附/解吸的速率不同，使得不同组分分离。
超临界流体色谱柱的分离效果主要受到以下几个因素的影响。温度的影响。超临界流体的物理性质会随温度的改变而发生变化。温度的升高可以增加流动相的扩散能力，加快分离速度。其次，填充物的选择也影响到分离效果。不同的填充物具有不同的表面性质，能够对不同极性的化合物产生不同的吸附/解吸作用。最后，流速也影响到分离结果。较高的流速能够提高分离速度，但也可能降低分离效果。
超临界流体色谱柱的使用步骤如下：
1.预处理：按照厂商要求进行预处理，以去除残留的有机物等污染物。
2.装柱：将已预处理的色谱柱连接到色谱系统中，注意连接的严密性。
3.进样：按照所需分析样品的要求，选择相应的进样方式，如进样注射器进行进样。
4.流动相选择：根据分析目标，选择合适的超临界流体作为流动相，并添加适量的修饰剂(如酸、碱、添加剂)以调控分析条件。
5.柱温控制：超临界流体柱具有较宽的工作温度范围，可以根据需要进行温度控制，以优化分离效果。
6.检测器选择：根据分析的需求，选择合适的检测器进行色谱分析。
