技术文章

 

此酶免试剂盒可用于流行性出血热（EHF）病人血清中抗汉坦病毒IgG和IgM的定性检测。

前言简介
流行性出血热（EHF）又称肾病综合征出血热（HFRS），是由汉坦病毒（Hantaan type）引起的。与流行性肾病相比（因近距离接触普马拉病毒而被传染），HFRS的传染性更严重，一般都会伴随有尿毒症、呼吸麻痹和伴随有典型休克综合症的出血，甚至死亡。这种疾病起初的症状是流行性感冒样症状。HFRS起初的典型症状是血小板减少症和白细胞增多症。汉坦病毒主要分布于亚洲和巴尔干各邦地区，通过直接接触啮齿动物、啮齿动物的排泄物或分泌物而传染给人。士兵、农民和露营者都特别容易受到危险。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
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实验原理
包被孔中包被了重组的汉滩型汉坦病毒核壳体蛋白。在检测IgM抗体时，为了避免由IgG抗体或类风湿因子引起的非特异性因素的干扰，病人血清必须与类风湿因子IgG吸附剂一起孵育。
实验过程孵育期间，抗重组汉坦病毒抗原的特异性抗体会结合到固相包被板上。洗板后，我们分别用过氧化酶标记的抗人IgG和IgM抗体检测特异性的IgG和IgM。加入底物液后显色，溶液所显示的颜色强度与结合的抗体量成正比。之后用酶标仪读取OD值。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
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贮存及稳定性
试剂盒应当在2~8℃运输和储存，避免高温和阳光直射，没有打开的试剂能保存到有效期。包被条在封闭的袋子内2~8℃能保存到有效期。准备好的试剂的储存及其稳定性在相应章节已阐明。
开封的微孔板密封放置2-8℃下可保存至有效期。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
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样品采集和贮存EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
人血清EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。

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实验做需器材但试剂盒没提供EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
 

1、微移液管  体积（5; 20; 50; 100; 200; 1000 µL）

2、涡旋混合器

3、保温箱, 37°C

4、试管（用于样品稀释）

5、8道微量移液器

6、洗瓶,自动或半自动洗板机

7、酶标仪

8、双蒸水或去离子水

9、吸水纸,吸嘴,计时器

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实验前准备EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
实验前将试剂盒平衡至室温（18-25°C）.含结晶的缓冲浓缩液可在37°C下迅速将其溶解.实验前将其冷却至至室温（18-25°C）
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稀释浓宿成分的准备（以测32孔为例）EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
提示:实验前取所需量试剂,并迅速用于稀释.

提示:未稀释样品可于-20°C下保持数月
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实验步骤EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
1.将100μl即用型阳性质控、阴性质控、参考对照质控和稀释血清样品（如是IgM样品,需用类风湿因子吸附剂前处理）加入到相应的微孔中。
2.胶粘薄膜盖板，37℃下温育45分钟。
3.移除胶粘薄膜, 弃除孔内反应液.每孔加入300μl稀释洗涤液，重复洗板4次，在吸水纸上拍干去除残留液滴。
4.每孔中加入100μl稀释酶联物（IgG 或IgM）
5.胶粘薄膜盖板。37℃下温育45分钟.
6.移除胶粘薄膜, 弃除孔内反应液.每孔加入300μl稀释洗涤液，重复洗板4次，在吸水纸上拍干去除残留液滴。
7.加底物液和终止液,建议用8道微移液器,保证加液相等的时间间隔。避免产生气泡。
8.每孔中加入100μl TMB底物液
9.室温（18-25°C）温育10分钟
10.每孔中加入100μl终止液终止底物液反应。
11.20分钟内于酶标仪450nm处读取OD值。（参考波长：650nm）
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结果计算EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
用病人样品的OD值比上参考对照质控的OD值计算检验结果
A病人样品/ A参考对照质控= Q
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本译文仅供参考，详情请以原文为准。
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