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生化试剂盒常见问题

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2024/3/6 9:01:53
1. 生化试剂盒的测定原理?
生化试剂盒通过化学反应/酶促反应或物质结构特点测定样本中物质含量或酶活;所用仪器一般为分光光度计和酶标仪,两者的测定原理都是 朗伯比耳定律: A=kbc,即当适当波长的一束平行单色光照射固定浓度均匀溶液时,其吸光度与光通过的液层厚度成正比。土壤、水质、动植物组织、血清、细胞细菌、食品等 样本均可以进行测定。
2. 如何选择不同规格的试剂盒?
首先根据本实验的实际情况选择,实验室有酶标仪的且有该检测波长的可以选择微量法试剂盒;实验室有分光光度计的,且有相应规格的比色皿既 可以选择常量法也可选择微量法试剂盒。建议购买前先阅读的说明书,对其中自备的仪器和试剂进行确认。
3. 收到试剂盒后如何保存?
如果收到试剂盒,暂时不用,可按照外包装上指示的温度统一保存;拆开包装后,请按照每个试剂的保存温度进行保存,有些试剂忌反复冻融; 有些试剂为粉剂,溶解之后性质不稳定。
4. 试剂盒的有效期是多长?
一般生化试剂盒有效期为6个月,也有特殊货号生化试剂盒有效期为1年;具体以实际收到货物的标签信息为准。
5. 收到试剂盒后应该从哪一步做起?
强烈建议客户先拿出2-3个预期结果差别较大的样本做预实验。在实验的过程中,首先将试剂盒中的说明书通读一遍, 检查试剂盒中各成分的量与说明书符不符合,溶解或使部分试剂回复至室温,然后处理样本,样本提取完成后,再溶解一些粉剂,开始实验。
6. 买了多个试剂盒,样本只有很少可以只用一种提取液提取吗?
一般同一个系列的试剂盒中,酶活测定的提取液类似,含量测定的提取液类似。但具体的请具体查询。
7. 待测样本必须是鲜样的吗?冷冻样本是否可以用?
新鲜样本和冷冻样本都可用于大多数指标的测定,有一些生理活性物质容易降解,建议用新鲜样本测定, 如辅酶Ⅰ、辅酶Ⅱ、谷胱甘肽、线粒体复合体等。冷冻样本建议在-70℃或者液氮中保存。一般样本在4度能都 保存一周,-20保存一个月,-80保存3个月
8. 土壤酶活性测定可以用鲜土吗?
由于土壤颗粒大小不一致导致水分含量不一样,且取样量较少,为了保证测定的重复性,建议将鲜土风干并 过筛后取样。若用鲜土测定,需保证样本的颗粒大小一致水分含量相似,建议过40目筛后取样,且同时测定 的样本要保持一致,最好不要一组样本用风干土,一组用鲜土,风干后的土样在-20保存1个月测定大部分酶活 几乎不会有损失;某些土壤的成分如硝态氮、铵态氮等在风干过程中会发生显著变化,必须用新鲜样品进行分析。
9. 样本研磨的方法?
样本研磨我们一般用到三种方法: 第一种:将研钵置于冰盒上匀浆即冰浴匀浆,在匀浆的过程中注意匀浆器浸于冰中,防止因为摩擦引起的温度过高,提取液可以在匀浆过程中或者匀浆后加入。 第二种:用液氮匀浆,液氮研磨前将样本洗净,尽量剪成小块,放入研钵中,加入液氮研磨,液氮挥散后尽快加入第二次液氮直至研磨成粉末状,避免其过程中 反复冻融,同时要做好保护措施,防止冻伤手指。完成后将粉末收集到离心管中加入缓冲液。样本可以提前称量号也可研磨完后称量。 第三种:使用匀浆机进行匀浆,将称好的组织放入离心管中,加入适量提取液,加入钢珠。并将模块提前遇冷,按照机器指示进行操作。一般的动物组织用 该方法效果尚可,有些机器对植物组织的处理效果不好。
10. 测定前是如何调零?
使用分光光度计的用户,用蒸馏水或相应的有机试剂直接调零。使用酶标仪的用户,可以在一个孔里加入200μL的蒸馏水或去离子水,作为调零孔, 也可不用调零,后续计算中会有空白孔。
11. 样本如何稀释或浓缩?
样本测定值若超出检测范围,可以将提取的上清液用提取液稀释后重新测定。一般从高到低,按照2倍,5倍,10倍,20倍的顺序,选择一个合适的稀释 倍数。样本测定值若低于检测范围,可以提高样本浓度,如称取0.2g样本加入1mL提取液匀浆,相当于将样本浓缩2倍。
12. 如何保证测定温度?
(1)根据说明书中测定温度,提前打开保温设备(如水浴锅),设到温度,在达到温度后,把冷藏的试剂转移到保温设备中保温10-30分钟以上,以保证反应一开始,就在温度中进行。 (2)对于拥有酶标仪的用户,直接提前预热,在达到设定温度后,可以直接把预热后的试剂,加入酶标板,然后开始反应。 (3)在保温设备(水浴锅和金属浴,最好是前者)进行。注意提前对保温设备进行预热,达到设定温度后再进行反应。但是仅适用于能够终止的反应。 (4)对于瞬间完成的反应,或者对温度不敏感的反应,为了提高重复性,最好在同一温度下完成检测。例如打开空调,设定在室温,如25℃。 当然,所有控温设备,都要进行预热。
13. 试剂盒有哪些常见规格?
(1)50管的试剂盒,常量法试剂盒,用分光光度计检测。1mL的比色皿检测。 (2)100管的试剂盒,微量法试剂盒,用酶标仪(酶标板)或者分光光度计(0.25 mL比色皿)检测。
14. 试剂盒规格中是什么意思?
(1)50T/48S:50T指能够做50次测定,48S指可以测试48个样品。如果每个样品重复测定3次,那么只能测定16个样品。其中有2次测定用于空白管或者 对照管。值得特别注意的是,50T/24S中由于每个样品测定都需要做对照,因此能够测定样品的数量仅为8个(假设做3次重复) (2)100T/96S:100T指能够做100次测定,96S指可以测定96个样品,如果每个样品重复测定3次,那么只能测定32个样品。其中有4次测定用于空白管或 者对照管。 注意由于瓶璧和移液器吸附等,通常要比理论测定次数少1~3次。其它规格的含义依次类推。值得特别注意的是,100T/48S中由于每个样品测 定都需要做对照,因此能够测定样品的数量仅为16个(假设做3次重复)。
15. 试剂盒中含有干粉的试剂应该怎么稀释保存?
一般试剂为粉剂的,可能更多的考虑到配成溶液后的稳定性差,如NADH,或者和其他试剂溶解在一起会在不同的温度下有其他的化学反应。 -20℃保存的粉剂建议溶解后分装保存,避免反复冻融。


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