支原体是什么？如何判断细胞是否被支原体感染？如果感染了，细胞应该如何处理？
以上三个问题，大多数养细胞的同学都会遇到，我们今天就讲一下支原体污染的问题。
支原体，是一种没有细胞壁结构，在独立生活和细胞内寄生之间存活的原核生物，其结构和典型的细菌相近。
部分支原体可以致病，例如肺部支原体。由于支原体没有细胞壁，许多常见的抗生素，如青霉素对其没有杀伤力。
和常见的细菌污染不同，细胞被支原体污染后，采用常规显微镜无法直接在明场视野下看到支原体，后者也并不会直接破坏宿主细胞结构，而是改变细胞的代谢。
所以，细胞往往表现出生长状态变差，例如生长缓慢，不像细菌污染那样大量死亡。因此，被支原体污染的细胞是很难察觉出异样的。
那么，如何判断细胞是否被支原体污染呢？
常用的方法有荧光染色、PCR、ELISA、免疫染色、放射自显影以及微生物学分析。
对于大多数同学而言，最简的办法，应该是采用荧光染色。具体来说，就是使用Hoechst 33258对细胞进行染色。
其原理是被染色后的细胞，在50X或100X目镜下观察，可以看到细胞核呈蓝色荧光，细胞内染色质上有明确的蓝色荧光微粒或丝状物，后者就是支原体的标志特征。
动物细胞培养 第7版 配图
使用Hoechst 33258进行染色的实验方法见下图（参考资料：动物细胞培养 第7版）。
如果实验室有条件的同学，也可以直接购买商业化的检测试剂盒，这样会更加方便和高效。
我们之前讲过，如果细胞被微生物污染，例如细菌，那么应该直接把被污染的细胞清理掉，而不是尝试挽救。
同理，当细胞被确认感染了支原体后，第一选择的处理措施依然也是清理掉污染的细胞。
除非该细胞非常重要，或无法替代，此时我们可以尝试去除支原体污染。以下，我们也为大家分享支原体清除的实验操作建议。（参考资料：动物细胞培养 第7版）
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