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细胞

 1 T-25瓶

细胞说明书

一份

细胞来源：

DSMZ细胞库

培养条件：

培养基：90%胎牛血清+10%FBS

气相：空气95%，二氧化碳5%

温度：37℃

培养：

一、贴壁细胞

1.用75%酒精喷洒整个瓶消毒，将其平躺置于培养箱中进行2-3小时的缓冲，.然后置于无菌操作台，打开瓶口，将其中的培养液去掉，再往其中加入5-6mL新鲜培养基并置于细胞培养箱中培养，根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代；

2.待细胞长满瓶底面积80%-90%，需要对其进行传代，第一次传代比例为1:2。

3传代步骤：将0.25%含EDTA胰酶置于37°预热，倒掉培养瓶中的培养基，往培养瓶中加入1mlPBS，轻晃洗涤后弃去。往瓶中加1ml预热好的胰酶，置于37°孵育消化（第一次消化需时常取出置于显微镜下观察，以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为最佳消化时间，记录较适合消化时间，以便于下次消化），消化好后加入1ml完培终止消化。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞，使之脱落，然后收集细胞悬液，1200rpm离心3min，弃上清，加入完培重悬细胞，进行传代。

二、悬浮细胞

1.用75%酒精喷洒整个瓶消毒，然后置于无菌操作台，打开瓶口，轻轻吹打后，将其中的细胞悬液转移到离心管中，然后1200rpm离心3min，去上清；

2.将离心好的细胞转移至T-25瓶中，并加入5-6mL新鲜培养基，然后将其置于细胞培养箱中培养，根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液（离心后去旧液，加入新鲜培养基）；

3.显微镜观察细胞数目比较多时，对其进行传代，第一次传代比例为1:2（离心后平均分成两瓶培养）。

细胞总数：

1~3*10⁶

传代周期：

2-3天

传代比例：

1:2~1:4

换液频率：

2-3天

冻存液：

90%FBS+10%DMSO