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补体遗传多态性的检测

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2012/2/25 12:09:19

补体遗传多态性的检测大多分二步进行,*步是用琼脂糖高压电泳或聚丙烯酰胺等电聚焦电泳将EDTA抗凝血浆通过凝胶电泳,根据分子量的大小、所带电荷的多少及等电点(p1)将血浆蛋白分开。第二步是免疫固定或溶血鉴定,琼脂糖高压电泳或聚丙烯酰胺等电聚焦后,在凝胶板上铺上抗补体某一成分的抗血清,使其与凝胶板上的抗原结合,形成分子量较大的免疫复合物沉淀嵌在凝胶孔中,不易漂洗掉,故称免疫固定。将免疫固定后的凝胶板在生理盐水中漂洗,除去其他蛋白成分。烤干,考马斯亮蓝染色。

依照第六届补体定型会议标准或标准品,判断待测样本补体的同种异型。或用溶血法将致敏SRBC和缺乏某一补体成分的豚鼠血清或人血清混合,倾倒在电泳完毕的凝胶板上,凝胶板上的待测补体成分使缺乏的补体成分得以补偿,酶反应发生,导致溶血反应,凝胶板上可出现待测样本补体某一成分的溶血带。

补体C4有两个基因座位,分别为C4A、C4B,两者均表现高度的遗传多态性,现已发现30余种同种异型。C4遗传多态性在人类渊源、法医鉴定及与疾病相关的研究领域受到极大的重视。C4遗传多态性的检测方法可分两种,一种是琼脂糖高压电泳加免疫固定,另一种是琼脂糖高压电泳后加溶血覆盖。在有抗血清的情况下,使用前者简单、方便、易行。仅在C4两个基因座位不易辨别时才采用后者。

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