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细胞电转实验的主要影响因素有哪些?

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2024/5/10 8:55:21
1、细胞密度对电转的影响
 
细胞系电转的细胞密度最好在0.5M-2.0M/20ul,或2.5M-10M/100ul. 常用1M/20ul. PBMC直径更小,细胞密度一般为1M-5M/20ul, 或5M-25M/100ul。细胞密度越高可以增加细胞间电流辅助,从而增加细胞的有效电转面积。密度高时电压需要稍微调高一些,所以电转时细胞密度根据实验需要选定后尽量不要变化。
需要特别注意的地方:一个样品加进电击管后,不要等候,马上进行电转,完成后再处理下一个样品,不要把一批样品全部加样完成后再一起电转。等候时间过长,细胞沉降也会导致电击管内上下细胞密度不均匀而降低电转效率。电转完成后细胞可以马上取出培养,也可以等全部样品处理完毕再取出培养。
 
2、细胞聚团对电转的影响
 
当细胞聚团时,其中只有一侧细胞可以被电转,中间和另一侧细胞不能被电转,降低电转效率。所以消化细胞过程中注意细胞不要成团。
 
3、温度对电转的影响
 
温度对电转影响也很大。一般室温(23度)适宜进行电转实验。温度越低,需要电压越高。4度电转比室温23度电转大概需要增加3%到5%的电压。所以为保证电转实验结果可重复性,需要将每次的电转温度保持一致。
 
4、DNA质量对电转的影响
 
DNA越纯净,越有利于电转。DNA中杂质较多时,细胞毒性大,非常不利于电转。市场上在售的品牌质粒提取试剂盒一般都可以。DNA加得比较多时,电转效率呈线性递增。但是电转时DNA加的过高也会产生细胞毒性,电压需要稍微下调。所以DNA浓度应根据实验需要相应调整,浓度范围一般在10ug/ml-200ug/ml。

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