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细胞消化的关键点!

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2024/5/13 16:33:19

一,细胞润洗次数

绝大部分细胞用胰酶润洗一次即可

胰酶是一种蛋白酶,酶切位点是肽链的Lys或Arg两个残基的羧基端肽链,通过在特定位置上降解蛋白,使细胞膜上与培养皿壁结合处蛋白降解,从而使两者分离。这时,细胞由于自身内部细胞骨架的张力以及培养液表面张力可成为球形。

由于在细胞培养中,胰蛋白酶的作用是使细胞间的蛋白质水解从而使细胞离散。胰酶作用时间过长、作用次数过多,都容易破坏细胞表面结构。

在吸去培养基后,用37℃预热过的PBS润洗细胞表面1-2次,随后加入适量胰酶,以能够平铺在器皿底部一层,略盖过细胞为原则。可放入37℃培养箱中孵育1-2分钟。

二,何时终止消化

贴壁细胞层呈流沙状可移动即可终止消化

有不少细胞培养人员,喜欢把全部细胞,消化成间隔分布很离散的单个圆形的细胞,但实际上,此时的细胞已经处于“消化过度”的状态了。

因此,肉眼观察下,50%左右细胞呈现流沙状,或镜下观察细胞质回缩,细胞之间不再连接成片,即可加入胰酶2-3倍体积的含血清培养基,终止消化。

逐典TrypLUS消化液是一种胰蛋白酶类似物(Trypsin Like Enzyme),是一种通过生物工程制备的非动物源性重组蛋白酶,与胰蛋白酶有相似的解离动力学,稳定性更高,纯度更好,消化更温和,细胞毒性更低。目前主要应用于细胞培养中,可以在赖氨酸和精氨酸的C末端切割肽键,可以替代猪或牛胰蛋白酶(Trypsin)对贴壁细胞的消化解离。生物制药中,GMP级别的TrypLUS能够为疫苗生产、病毒载体生产提供高质量和高性价比的贴壁细胞消化解决方案。




逐典TrypLUS消化液优势

1. DMF备案

2. 非动物来源

3. 室温贮存,无需胰酶抑制剂,稀释即可终止

4. 消化温和,消化后细胞活性高

5. 即开即用,方便快捷

逐典TrypLUS消化液应用案例














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