Thermo Fisher Scientific(赛默飞)的热循环仪是一种用于进行聚合酶链式反应(PCR)的实验室设备。以下是使用Thermo Fisher热循环仪的具体方法和注意事项。
主要步骤
1. 准备PCR反应混合物
在无菌环境中将以下试剂按照PCR反应体系的要求混合在PCR管中：
模板DNA
正向引物和反向引物
dNTPs(脱氧核苷三磷酸)
PCR缓冲液
MgCl2(如果缓冲液中不包含)
Taq DNA聚合酶或其他热稳定DNA聚合酶
无菌水
2. 设置PCR仪参数
根据实验要求设置PCR仪的参数，包括：
初始变性：95℃，2-5分钟
循环参数(通常30-40个循环)：
变性：95℃，30秒
退火：50-65℃，30秒(根据引物的Tm值调整)
延伸：72℃，30秒-1分钟(根据扩增片段的长度调整，每1000 bp需1分钟)
最终延伸：72℃，5-10分钟
保温：4℃
3. 加载PCR反应管
将准备好的PCR反应管放入热循环仪的模块中，确保每个反应管都放置牢固，避免接触不良。
4. 启动热循环仪
选择预设的程序或手动输入上述设置，启动PCR反应。
5. 监控和完成反应
在PCR反应进行过程中，监控仪器运行情况。反应完成后，热循环仪会自动降温到保温温度(通常为4℃)。
6. 分析PCR产物
反应完成后，通过琼脂糖凝胶电泳等方法进行PCR产物分析。
热循环仪的型号
Thermo Fisher提供多种型号的热循环仪，常见的有：
Applied Biosystems™ SimpliAmp™ Thermal Cycler
Applied Biosystems™ Veriti™ Thermal Cycler
Applied Biosystems™ ProFlex™ PCR System
使用注意事项
无菌操作：确保无菌环境，避免污染。
合理设置参数：根据实验需求优化退火温度和循环次数。
试剂质量：使用高质量试剂，确保实验结果的可靠性。
设备维护：定期校准和维护热循环仪，确保其正常运行。
通过以上步骤，你可以有效地使用Thermo Fisher热循环仪进行PCR实验。每个型号的具体操作界面和功能可能略有不同，建议参阅设备的操作手册以获取详细信息和指导。
