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BCA蛋白定量试剂盒价格是多少(蛋白定量试剂盒使用方法)

和元李记(上海)生物技术有限公 >> 进入商铺

2024/5/24 15:44:55

BCA (Bicinchoninic acid) 法是目前应用比较广泛的蛋白质浓度测定方法。基于双缩脲反应,即在碱性环境下蛋白质将Cu2+还原成Cu+,Cu+与BCA试剂形成紫颜色的络合物,在562 nm处有高的吸光值,该反应产物的量与蛋白质浓度成正比。测定其在562 nm处的吸光值,并与标准曲线对比,即可计算待测蛋白的浓度。该方法快速灵敏、稳定可靠且对不同种类蛋白质变异系数很小。试剂盒中提供了浓度稳定的蛋白标准品用于制作标准曲线。

BCA 蛋白定量试剂盒可用于试管法检测,也可用于微孔板法检测。试管法需较大量蛋白样品(100 μL)和工作液(2 mL),蛋白样品与 BCA 工作液的比率为1:20(v/v),蛋白质测定范围为20-2000 μg/mL,采用加强法可以检测到 5 μg/mL;微孔板法操作简单方便,仅需少量(10-25 μL)的蛋白样品和工作液(200 μL),蛋白样品与工作液的比率为1:20(v/v)或者1:8(v/v),蛋白质测定范围为 20-2000 μg/mL,采用加强法可以检测到 5 μg/mL。

BCA蛋白定量试剂盒价格是多少?

李记生物BCA蛋白定量试剂盒价格198元,规格500T!

BCA蛋白定量试剂盒使用方法

一、配制标准品和工作液

1. 配制 BSA 标准品体系(线性范围20-2000 μg/mL或者5-250μg /mL标准品制备各2种配置方法,请根据习惯选用恰当方式)。【注】:BSA 标准品浓度为2 mg/mL,稀释液为蛋白样品的溶解液,原则上蛋白样品在什么溶液中,标准品也宜用什么溶液稀释。但也可用水或 1 X PBS 进行稀释。

BSA 标准品体系配制表(配制后可放置于4℃ 冰箱多次使用)

表1.微孔板检测BSA 标准品体系配制(线性范围 20-2000 μg/mL)配置方法一

Vial

稀释液体积(μL)

BSA标准品体积(μL)

BSA终浓度(μg/mL)

A

0

100

2000

B

25

75

1500

C

50

50

1000

D

83

50

750

E

75

25

500

F

140

20

250

G

150

10

125

H

158

2

25

I

100

0

0=Blank

表2.微孔板检测BSA 标准品体系配制(线性范围 20-2000 μg/mL)配置方法二

Vial

稀释液体积(μL)

BSA标准品体积(μL)

BSA终浓度(μg/mL)

A

0

BSA 标准液100

2000

B

25

BSA 标准液75

1500

C

65

BSA 标准液65

1000

D

35

Vial B 35

750

E

65

Vial C 65

500

F

65

Vial E 65

250

G

65

Vial F 65

125

H

80

Vial G 20

25

I

80

0

0=Blank

表3.BSA标准品体系(微孔板检测,线性范围 5-250μg /mL)配置方法一

Vial

稀释液体积(μL)

BSA标准品体积(μL)

BSA终浓度(μg/mL)

A

70

10

250

B

75

5

125

C

78

2

50

D

79

1

25

E

399

1

5

F

80

0

0

表4.BSA标准品体系(微孔板检测,线性范围 5-250μg /mL)配置方法二

Vial

稀释液体积(μL)

BSA标准品体积(μL)

BSA终浓度(μg/mL)

A

70

BSA 标准液10

250

B

40

Vial A 40

125

C

45

Vial B 30

50

D

40

Vial C 40

25

E

40

Vial D 10

5

F

40

0

0

2. 配制 BCA工作液

(1) 计算所需要的总BCA 工作液体积。总BCA工作液体积=(标准品数量+待测样品数量)x重复数x每个样品所需要的BCA 工作液。【注】:试管法检测时每个样品加 2.0 mL BCA 工作液,微孔板检测每个样品加200 μL BCA 工作液。

(2) 配制BCA工作液:50 体积的BCA 试剂 A 中加入1 体积的BCA 试剂B(A:B=50:1),充分混匀。【注】:BCA工作液装入密封容器内,室温条件24h 稳定。

二、检测方法

1. 试管检测方法(样品:BCA工作液=1:20)

(1) 各取100 μL 标准品和待测样品加入到反应管中。

(2) 每管加入2.0 mL BCA 工作液,混匀。根据待测样品的浓度范围选择孵育时间和温度。

标准孵育方法:37℃ 孵育30 min 或者室温2h(检测范围:20-2000 μg/mL)

增强孵育方法:60℃ 孵育30 min(检测范围:5-250 μg/mL)

【注】:BCA 检测蛋白浓度,延长孵育时间会加深颜色反应。升高温度会加快显色反应,但是温度升高和时间延长会降低检测下限,以及降低工作线性范围。若蛋白浓度很低,可在较高温度孵育或者适当延长孵育时间。

(3) 冷却到室温。在分光光度计上进行检测,设定波长为 562 nm,在10 min内对所有样品读数。【注】:由于BCA 反应达不到真正的反应终点,即使温度降低至室温生色反应液会继续。但是,由于室温下生色比率相当低,因此若是10 min 内能对所有的样本进行 562 nm 吸光度的测试,不会导致明显错误。

(4) 根据BSA 标准品的吸光度(减去标准品中空白孔的OD 值即最终的读数),绘制标准曲线(X-蛋白浓度μg/mL;Y-最终的OD 562nm)。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。

2. 微孔板检测方法(样品: BCA工作液=1:20)

(1) 各取10 μL标准品和待测样品加入到微孔板中。【注】:样品与工作液比例为1:20,检测范围为125-2000 μg/mL。若样品浓度非常低,可使用25μL 标准品和待检测样品进行检测(即1:8),这时试剂盒的检测范围为 20-2000 μg/mL。

(2) 每孔加入200 μL BCA 工作液,枪头吹打充分混匀。盖上微孔板,37℃ 孵育30 min。

(3) 冷却到室温,在酶标仪上的562 nm 波长范围处检测吸光度。

(4) 根据BSA标准品的吸光度(减去标准品中空白孔的OD值即最终的读数),绘制标准曲线( X-蛋白浓度μg/mL;Y-最终的OD 562nm)。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。


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