原地的杂交
纳米金探针的小尺寸及其随后接近核抗原的能力,与银增强获得的高灵敏度相结合,使它们成为用于特异DNA序列的超灵敏原位杂交检测的优异试剂,无论有无原位PCR。使用生物素化的酪胺(催化报道沉积或CARD,也称为酪胺信号扩增或TSA)扩增靶信号获得了惊人的结果:用纳米金-链霉抗生物素蛋白和银增强检测产物,即使在只有一个或两个靶基因拷贝的细胞中也产生清晰的信号
用CARD扩增纳米金-银染技术检测SiHa细胞中人乳头瘤病毒16的单拷贝。这种来源于宫颈癌的细胞系仅含有一到几个拷贝的人乳头瘤病毒16,其表现为单个斑点。细胞离心制剂,核固红复染(光学显微照片由萨尔茨堡州兰肯斯坦市G. Hacker博士提供。奥地利)。
优势
- 比NBT-BCIP碱性磷酸酶或过氧化物酶结合标记扩增用于单基因拷贝解析更灵敏。
- 大多数情况下不需要更长的PCR程序:避免了由于错误引发和扩增子扩散导致的假阳性。
- 用标准明视野显微镜很容易看到黑色。不需要昂贵的荧光光学器件,也没有自发荧光或漂白的问题。
- 黑色信号颜色与全强度标准细胞和核染色(H & E、核坚牢红、甲基绿)兼容。
- 也可用于电磁研究的高空间分辨率信号。
电子显微镜
纳米金为电子显微镜树立了很好的性能标准。
纳米金缀合物很容易扩散几十微米到组织、渗透细胞和细胞核中,而大多数胶体金探针很难做到这一点。染色更符合化学计量,背景更低。尽管1.4纳米金颗粒在50-120 kX放大倍数下甚至在80纳米的切片中(在其他未染色的样品中)都是直接可见的,但在用银显影剂(LI银或HQ银)短暂增强(1-5分钟)后它们更容易显现。即使使用醋酸铀、锇或柠檬酸铅染色,也可以在较低的放大倍数下轻松看到2至100纳米的银颗粒(大小取决于显影时间)。
这张扫描透射电子显微镜(STEM)图像清楚地显示,单马来酰亚胺-纳米金标记(箭头)具体发生在IgG分子的铰链硫醇位点。
光学和共聚焦显微镜
用抗微管蛋白初级抗体标记的纺锤体微管,随后是(左)山羊抗小鼠胶体金或(右)山羊Fab抗小鼠纳米金(光学显微照片由俄亥俄州立大学D. Vandré和R. Burry博士提供。原始放大倍数= 1300倍)。
纳米金探针对透化细胞和细胞核具有出色的穿透性,类似于免疫荧光探针,远优于胶体金探针。“纳米金-Fab”探针比免疫荧光IgG标记小。纳米金探针绝对不会聚集,而且非常稳定,因为纳米金与结合生物分子共价连接。通过随后的短暂(5-15分钟)银增强(LI银),它们给出了即使在普通明场光学显微镜(不需要紫外光学器件)中也可见的信号,其灵敏度通常优于荧光。由于同样的纳米金探针也可以用于电镜,因此可以在光学显微镜或共聚焦显微镜下进行初步染色,同时可以在超微结构水平上检查平行样品。这种灵活性是荧光探针所不具备的。纳米金现在可以与链霉亲和素和抗生物素Fab’结合用于核酸检测。
为快速简单的LM开发
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印迹和免疫化学技术
纳米金-抗体结合物已用于检测《0.1皮克(7×10-19摩尔)的抗原。这种灵敏度优于大多数放射性、酶、胶体金或荧光技术。事实上,纳米金标记是已知*灵敏的检测方法之一。它与化学发光法不相上下,但提供了长期记录,没有胶片、显影和暗室程序的麻烦,而且时间短得多。纳米金试剂也可用于Westerns,我们的纳米金-链霉亲和素或纳米金-抗生物素结合物可提供超灵敏的核酸检测。
纳米金免疫印迹
纳米金-用锂银(纳米探针)开发的针对小鼠IgG的抗小鼠抗体Fab。这些超小金颗粒很好地使银沉积成核,从而实现了高的灵敏度。该免疫斑点印迹显示出0.1皮克的灵敏度(箭头)。
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纳米金标记条带的凝胶染色
蛋白质或其他分子用纳米金标记后,可以在聚丙烯酰胺凝胶上运行。随后,可能会开发出LI Silver或者GoldEnhance™对含金带进行特殊染色。该过程快速、灵敏且具有选择性,只需几分钟即可完成密集染色。它也适用于转印污点。这可用于区分哪些成分用纳米金标记