制备液相色谱中的流动相设计与调整是确保实验成功和获得准确数据的关键步骤。以下是对流动相设计与调整的详细解释，包括分点表示和归纳，以及参考文章中的相关数字和信息：
一、流动相配置注意事项
混合方式：
流动相的混合通常按照体积比（V/V）进行，因为溶液的体积随温度变化而变化，按重量比混合虽然重复性较好但操作繁琐。
例如，配置50%乙腈水溶液时，可以直接量取乙腈500ml和水500ml，然后充分混合。
试剂要求：
高效液相色谱仪对试剂的纯度有严格要求，如甲醇、乙腈等必须为色谱级纯。
水应为超纯水或购买质量有保证的纯净水。
二、流动相设计与调整原则
由强到弱：
一般先用极性强的90%的乙腈（或甲醇）/水（或缓冲溶液）进行试验，根据出峰情况调整有机溶剂的比例。
三倍规则：
每减少10%的有机溶剂（甲醇或乙腈）的量，保留因子约增加3倍。这是一个省力且有效的调整方法。
粗调转微调：
当分离达到一定程度时，应将有机溶剂10%的改变量调整为5%，并逐渐降低调整率，直至各组分的分离情况不再改变。
三、流动相pH值的调整
弱酸样品：
流动相的pH值越小，组分的k值越大。当pH值远低于弱酸的pKa值时，弱酸主要以分子形式存在。
分析弱酸样品时，通常在流动相中加入少量的弱酸，如50mmol/L磷酸盐缓冲液和1%醋酸溶液。
弱碱样品：
对于弱碱样品，情况相反。分析时通常在流动相中加入少量的弱碱，如50mmol/L磷酸盐缓冲液和30mmol/L三乙胺溶液。
四、含缓冲盐流动相的配制
配置缓冲盐使用的盐试剂也尽量使用色谱级纯，称样要精准。
配置好后必须通过0.45μm或0.22μm滤膜过滤并超声脱气20min以上。
注意：缓冲盐要临用新配。
总结
流动相的设计与调整是液相色谱实验中至关重要的一环。通过合理的混合方式、试剂选择、pH值调整以及含缓冲盐流动相的精确配制，可以确保实验的高效性和准确性。同时，根据实验需要，灵活运用由强到弱、三倍规则和粗调转微调等原则，可以进一步优化实验条件，提高分离效果。
