立式蒸汽灭菌器的工作原理是利用饱和水蒸汽作用于负载上微生物一定时间，使微生物的蛋白质变性从而导致微生物死亡，以达到灭菌的目的。它通过湿热杀灭微生物，蒸汽有较强的杀菌作用，能使菌体蛋白质含水量增加，使其容易因受热而凝固，加速微生物的死亡过程。
其使用注意事项如下：
1、开盖前必须确认压力表指针为零，灭菌器内无压力。
2、灭菌器水源水质必须符合高纯水的要求，不得加入未经净化处理过的自来水等水源。
3、对不同类型、不同灭菌要求的物品，不得放在一起灭菌。
4、灭菌周期结束需要进入下一门灭菌周期前，应补足水位。
5、每次灭菌结束，应将灭菌器侧门板上带锁电源开关关闭，将电源断路器断开，灭菌器周围应保持清洁。
6、灭菌器内积水应每天排除干净，防止积水垢影响电热管正常发热及蒸汽质量，影响灭菌效果。
