GB 5009.35-20236《食品安全国家标准 食品中合成着色剂的测定》代替了以下三大标准：
1、GB 5009.1412016《食品安全国家标准 食品中诱惑红的测定》
2、GB/T 9695.6-2008《肉制品 胭脂红着色剂测定》
3、GB/T 21916-2008《水果罐头中合成着色剂的测定 高效液相色谱法》
本文针对新标准主要的变化和实验中需要注意的地方进行解读与分享。
一、GB 5009.35-2016 与GB 5009.35-2023 对比需要注意的地方
| 项目 | 旧标准 （5009.35-2016） | 新标准 （5009.35-2023） |
| 原理变化 | 聚酰胺粉吸附法/液-液分配法 | 乙醇氨水提取- 固相萃取净化 |
| 仪器条件 | 柱温：35℃，检测波长254nm | 柱温：30℃，检测波长：415 nm(柠檬黄、喹啉黄),520 nm(新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、酸性红和赤藓红),610 nm(靛蓝、亮蓝)。 |
| 分析时间 | 21min | 42min |
| 检出限和定量限 | 方法检出限:柠檬黄、新红、苋菜红、胭脂红、日落黄均为0.5mg/kg,亮蓝、赤藓红均为0.2 mg/kg(检测波长254 nm时亮蓝检出限为1.0 mg/kg, 赤藓红检出限为0.5mg/kg)。 | 样品取样量为2g,定容体积为2mL时,柠檬黄、新红、胭脂红、日落黄、喹啉黄、赤藓红的检出限均为0.5 mg/kg,定量限均为1.5 mg/kg,苋菜红、诱惑红、亮蓝、酸性红、靛蓝的检出限均为(0.3mg/kg，定量限为1.0 mg/kg。 |
二、实验过程注意事项：
1、称取样品
称取样品时，需要注意均匀取样，以果酱为例，如果是盒装的，需要上中下层均匀取样，保证样品颜色均匀；硬质糖果，可加5ml水，40℃恒温震荡溶解后，再进行提取步骤。
2、样品提取
1) 乙醇氨水属于易挥发溶剂，需要现用现配；
2) 乳制品提取液遇到混浊，可采取高速冷冻离心或冰箱冷冻一段时间，再离心。
3) 固体样品，如粉丝，样品干硬，若水浴后，溶胀效果不佳，可以适当延长水浴时间，让样品充分溶解。
4)准确移取（乙醇氨水）提取液10ml，50℃氮吹浓缩至3ml左右，目的是为了保证过柱之前，充分去除氨水，保证上样pH=6左右，满足WAX混合型弱阴离子对上样也要求，保证小柱对合成着色剂有很好的吸附作用。（WAX混合型弱阴离子小柱对强酸性化合物具有很好的选择性）
3、过柱
1)WAX阴离子固相萃取小柱，不同批次之间有误差，同一批次需要进行验收测试，合格后才进行实验，确保实验结果准确性。
2)淋洗过程，如茶叶为例，天然色素较多，可适当加多点甲酸水和甲醇的量，去除水溶性和脂溶性天然色素杂质。
3)洗脱，若基质着色剂含量较多，可适当增加洗脱溶剂含量，直至洗脱至溶液无色为止；洗脱液氨化甲醇现配现用。
4)氮吹过程，氮吹至近干，不要全部吹干，对于粘稠基质，吹干，不易复溶。复溶液需要pH=9的乙酸铵缓冲溶液复溶，确保赤藓红的回收率。
5)若洗脱后，填料上还有残留颜色，并且回收率偏低，则考虑含氨水的提取液和洗脱液是否现配现用，氨水含量不足，导致ph值偏低，洗脱不完全。
4、实验结果
1)靛蓝合成着色剂性质不稳定，实验结果回收率偏低的话，很大原因是降解了，所以，建议靛蓝标准品现配现用。
2)实验结果11中合成着色剂回收率，除了赤藓红偏低，其余的回收率都满足90%-110%。最后一步的复溶液可试试pH=9的乙酸铵：甲醇=9:1，提高回收率。
3)过膜时候需要选择亲水的PTFE滤膜，才不会吸附色素。
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