羟自由基清除率检测试剂盒(Fenton微板法)
一、产品简介：
在生命活动的代谢过程中不断产生各种自由基，其中羟自由基·OH是体内的活性氧，可介导许多生理变化，羟自由基作用于体内蛋白质、核酸、脂类等生物分子，造成细胞结构和功能受损，进而导致体内代谢紊乱引起疾病，如引发不饱和脂肪酸发生脂质过氧化反应，并损伤膜结构和功能。羟自由基清除能力是样品抗氧化能力的重要指标之一，在抗氧化类保健品和药品研究中得到广泛应用。
雅吉生物羟自由基清除率检测试剂盒(Fenton微板法)又称羟自由基清除能力检测试剂盒或羟自由基检测试剂盒，其检测原理是H2O2/Fe2+ 通过 Fenton 反应产生羟自由基，并将Fe2+氧化为Fe3+，导致红色的邻二氮菲-Fe2+氧化为无色的邻二氮菲-Fe3+，使邻二氮菲-Fe2+在536nm处的最大吸收峰消失，可通过酶标仪测定530~540nm处吸光度的变化，据此可计算出羟自由基的含量变化，即可计算出样品的羟自由基清除率或清除能力。该试剂盒主要用于植物组织、血清、血浆等样本。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
二、产品组成：
名称规格 | 100T | 存储 |
试剂(A): 邻二氮菲溶液 | 15ml | 4℃ |
试剂(B): OH Assay buffer | 20ml | RT |
试剂(C): 亚铁显色液 | 10ml | 4℃ |
试剂(D): 氧化剂 | 10ml | 4℃ |
使用说明书 | 一份 | |
三、自备材料：
1、蒸馏水
2、实验材料：植物组织(芹菜、绿豆、玉米等叶片)、血液、组织样本等
3、研钵或匀浆器
4、离心机、离心管或试管
5、水浴锅
6、酶标仪、96 孔板
四、操作步骤(仅供参考)：
1、准备样品：
①植物样品：取正常或逆境下的新鲜植物组织，清洗干净，擦干，切碎，迅速称取，按1~1.5g 样品：4.5ml 蒸馏水的比例匀浆或研磨，室温静置 4h，3000g 离心 30min，上清液即为羟自由基粗提液，4℃保存备用。(亦可参考相关资料提取方法提取)
②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，4℃保存，用于羟自由基的检测。
③高活性样品：如果样品中含有较高浓度的羟自由基，可用蒸馏水进行恰当的稀释。
2、·OH加样：按照下表设置空白管、未损伤管、损伤管、对照管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，然后，置各管于 37℃水浴锅保温 1h。如果样品中的羟自由基(·OH)浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置平行管。
加入物(ml) | 空白管 | 未损伤管 | 损伤管 | 对照管 | 测定管 |
邻二氮菲溶液 | — | 0.15 | 0.15 | — | 0.15 |
OH Assay buffer | 0.2 | 0.2 | 0.2 | 0.2 | 0.2 |
亚铁显色液 | — | 0.1 | 0.1 | — | 0.1 |
蒸馏水 | 0.8 | 0.55 | 0.45 | 0.7 | 0.35 |
待测样品 | — | — | — | 0.1 | 0.1 |
氧化剂 | — | — | 0.1 | — | 0.1 |
3、·OH 测定：取96孔板，将各管溶液依次吸取300ul加至96孔板中，用酶标仪检测530~540nm处各孔吸光度值，依次记为A0、A1、A2、A3`、A3。
五、计算：
组织样品·OH 清除率(%)=[(A3- A3`)-( A2- A0)]/[ (A1- A0)-( A2- A0)]×100
=[(A3- A3`)-( A2- A0)]/(A1-A2)×100
备注：A0=空白管的吸光度值
A1=未损伤管的吸光度值
A2=损伤管的吸光度值
A3`=对照管的吸光度值
A3=测定管的吸光度值
六、注意事项：
1、 实验材料应尽量新鲜，如取材后不能立即检测，应存于 4℃。
2、 测定过程中的干扰因素较多，容易对测定的准确性和灵敏度造成影响。
3、 水浴的温度和时间应一致。
4、 如果没有分光光度计，也可以使用普通的酶标仪测定，但应考虑酶标仪的最大检测体积。
5、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
七、有效期：6 个月有效。4℃运输，4℃保存。
