手术室灭菌监测包括物理监测、化学监测和生物监测。生物监测是用微生物直接验证灭菌效果的监测方法，也是反映灭菌效果最重要的监测方法。它模拟实际灭活过程，难度超过实际负荷，综合了所有的灭菌参数，可反映微小失败，能推导和计算出10-6的无菌水平，因此生物监测是灭菌保障和风险控制的金标准。1
生物监测的步骤通常包括：
准备含有生物指示菌的纸片（菌片）和溴甲酚紫胨水培养基。2
将菌片放入密封试管中，同时将化学指示卡和留点温度计放入敞口试管中。
将试管放置在灭菌器内的不同位置（如蒸气口处、底部排气口处等）。
灭菌结束后，取出菌片并在严格无菌操作条件下放入灭菌后的溴甲酚紫胨水培养基内培养。
观察培养基的颜色变化，判断生物指示菌是否存活。
结果判定：
阳性对照组培养阳性，阴性对照组培养阴性，实验组培养阴性，判定为合格。34
阳性对照组培养阳性，阴性对照组培养阴性，实验组培养阳性，则灭菌不合格，同时应进一步鉴定实验组阳性的细菌是否为指示菌或污染所致。
此外，生物监测包或生物PCD（含一次性标准生物测试包）应置于灭菌器排气口的上方或生产厂家建议的灭菌器内最难灭菌的部位，经过一个灭菌周期后，自含式生物指示物遵循产品说明书进行培养。4
请注意，生物监测需要一定的培养时间，因此不能立即得到结果。在物理监测和化学监测通过后，生物监测应空载连续监测3次，合格后灭菌器方可使用。对于小型压力蒸汽灭菌器、生物监测应满载连续监测3次，合格后灭菌器方可使用。
