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2024/7/4 9:31:07台盼蓝染色原理
台盼蓝(Trypan blue)是一种细胞活性染料,常用于细胞计数和细胞活力检测。它可以通过细胞膜进入细胞,并与细胞内的核酸结合,使细胞呈现蓝色。对于丧失活性或细胞膜不完整的细胞,其细胞膜通透性增加,台盼蓝染料可以进入细胞内,使细胞染成蓝色。通过观察被染成蓝色细胞的数量,即可得出对应的细胞浓度。
细胞计数的操作流程
1-准备工作
·准备细胞悬液:将待检测的细胞培养至适当浓度,收集细胞并制备成细胞悬液。
·准备台盼蓝染料:将0.4台盼蓝染料用PBS缓冲液稀释至0.2%。
·准备细胞计数仪和计数板:使用全自动细胞计数仪(JSY-SC-031H)和血细胞计数板、盖玻片进行细胞计数。
·准备移液器和吸头:使用移液器和吸头吸取细胞悬液和台盼蓝染料。
2-加入台盼蓝染料
·取适量的细胞悬液与离心管中。
·加入等量的台盼蓝染料(0.2%),再用移液枪轻轻吹打混匀。
3-上机检测
·用移液器取10uL细胞混合液,加入血细胞计数板中。
·将加样后的血细胞计数板放至细胞计数仪(JSY-SC-031H)的载物台上,选择对应的计数模式,即可开始细胞计数分析(浓度计算公式=(四个大方格内细胞数之和)/4×(稀释倍数)×104)。
4-查看结果数据
计数完成后,点击数据详情,查看细胞浓度、细胞直径、细胞聚团率等数据。
注意事项
1-台盼蓝染料具有一定毒性,操作时需佩戴手套和口罩,避免接触皮肤和吸入气体。
2-台盼蓝染料需避光保存,避免阳光直射。
3-台盼蓝染料适用于大多数细胞类型,但无法很好的区分细胞和杂质,因此不适用于原代细胞、PBMC等含有大量杂质碎片的细胞类型。
4-加样前,可将台盼蓝静置数分钟,取上层。
5-加样时,应尽量避免气泡的产生,以免影响细胞计数的结果。
台盼蓝染料是一种常用的细胞活性染料,可用于细胞计数和活力检测。在使用台盼蓝染料进行细胞计数时,需要注意操作流程和注意事项,以确保结果的准确性。