做色谱分析的小伙伴们都知道,反相色谱(RP-HPLC)是应用最为广泛的一种分离模式,它可以分析从低极性到中高极性的多数化合物,常用的键合相类型有C18、C8和苯基等。然而,反相色谱也有它的一个使用局限性:就是一些大极性化合物在常规反相中保留较弱,从而无法进行后续的定性与定量分析。
对此我们该采取什么样的办法呢?
首先,最容易想到的是通过增加流动相中水相的比例以减弱洗脱强度,从而增加极性化合物的保留。一般来说,分析物的极性越大,流动相中水的比例也需要更高。那么问题来了,对于一些常规的C18柱在高比例乃至纯水相中耐受不好,很容易发生孔内干涸,也就是我们常说的“疏水塌陷”。一旦发生很容易出现色谱柱保留减弱等问题。