液相方法优化中的色谱柱的优化就是色谱柱的选型。选型的原则无非就是根据分析物的性质、流动相的条件、初步分离的结果等来选择合适的色谱柱。
强极性样品对于强极性的样品,C18色谱柱保留弱,可以选择碳含量更高的C18;或者选用亲水的AQ C18,用纯水相洗脱,会增强保留;再或者选用HILIC模式色谱柱。
弱极性样品
对于弱极性的样品,C18色谱柱保留很强或常规有机相洗脱不下来,可以尝试碳含量更低的色谱柱,或者苯己基,C8,C4等。
易污染样品
对于中药类或生物类样品,色谱柱容易被污染,可以尝试大孔径填料色谱柱更耐污染;
在分离度要求不高的前提下,也可以用粒径更大的色谱柱,柱压较低,随着污染柱压升高的空间比较大;
对于分离要求高,且容易柱压高的分离项目,可以尝试粒径更大的实心核填料的色谱柱,柱效与小粒径填料的色谱柱相当,柱压更低。
对于易污染色谱柱的样品,可以的话尽量多做一些样品前处理工作。
大分子样品
对于大分子的分析物,尤其是空间结构大,比如多肽、蛋白、核酸,聚合物等,选用大孔径填料的色谱柱。
样品pKa
我们通常根据分析物的pKa来选择流动相的pH,如果分析物pKa小于7,那么流动相pH应选择低于pKa-2,如果pKa大于7,那么流动相pH应选择高于pKa+2,但常规的硅胶基质色谱柱耐受pH范围为2-6,我们就根据流动相的pH来选择可耐受相应pH的色谱柱。
高柱温
如果柱温要求超过50℃,需要选择耐高温的色谱柱。
分离度差
对于分离度差的结果,我们可以尝试增加柱长,来提高分离度。
塔板数低对于塔板数低的结果,我们尝试减小色谱柱内径或填料粒径,来提高柱效。
塔板数低
对于塔板数低的结果,我们尝试减小色谱柱内径或填料粒径,来提高柱效。