阿维菌素类药物是由阿维链霉菌产生的一类广谱高效兽用抗寄生虫药，包括阿维菌素、伊维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素等。阿维菌素类药物可对动物体外如疥螨、蜱虫、跳蚤、线虫等寄生虫进行防治，降低寄生虫感染带来的负面影响。但随着科学技术的发展，发现阿维菌素类药物对多种生物类群均有毒副作用。根据GB 31650-2019要求，规定了阿维菌素不得在泌乳期使用，在牛奶中伊维菌素、多黏菌素和乙酰氨基阿维菌素三种药物的残留限_量要求依次为不高于10 μg/kg、15 μg/kg、20 μg/kg。
安谱实验参照《GB 31659.4-2022 奶及奶粉中阿维菌素类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》，采用CNWBOND HC-C18 SPE固相萃取柱净化，对牛奶、奶粉两种基质中阿维菌素类药物残留量进行测定，方法回收率高，精密度好。
一、样品前处理
样品提取
称取牛奶2 g（准确至±0.05 g）或奶粉0.5 g（准确至±0.01 g）于50 mL 离心管中，加乙腈8 mL，涡旋后200 r/min 水平振荡5 min，8000 r/min离心8 min，转移上清液至另一50 mL离心管中，加水10 mL、三乙胺25 μL，混匀，备用。
SPE小柱操作：
固相萃取小柱：CNWBOND HC-C18 SPE，货号SBEQ-CA0854 ，规格500 mg/6 mL；
活化：5 mL乙腈；
平衡：5 mL 淋洗溶液（30%乙腈水溶液，含0.02%三乙胺）；
上样：全部备用液，速度每秒1滴；
淋洗：5 mL淋洗液，抽干，5 mL异辛烷淋洗，抽干；
洗脱：5 mL乙腈洗脱，洗脱后抽干；
浓缩：收集洗脱液，50℃水浴氮气吹干，残余物中加50%乙腈水溶液1.0 mL，涡旋1 min充分溶解，滤膜（有机相尼龙针式滤器，SCAA-104）过滤后供液相色谱串联质谱测定。
基质匹配标准曲线
精密量取阿维菌素类药物标准工作液适量，用50%乙腈水溶液稀释阿维菌素、伊维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素浓度分别为0.5 ng/mL、1 ng/mL、2 ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL，50ng/mL、100ng/mL和400ng/mL的系列标准工作液。各取标准工作液1.0 mL，分别加入空白试料经提取、净化和吹干后的残余物中，充分溶解，作为基质匹配标准溶液，过微孔滤膜（有机相尼龙针式滤器，SCAA-104）后上机测定。以特征离子质量色谱峰面积为纵坐标、基质匹配标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。
二、仪器条件
2.1 液相色谱：
a) Athena C18-WP 液相色谱柱（2.1 mm*50 mm，1.8 μm，货号：LAEQ-2105UA）；
b）柱温：30℃
c）流速：0.40 mL/min
d）进样量：10 µL；
f）流动相：A：含0.1%甲酸的乙腈溶液，B：含0.1%甲酸的水溶液；
表2-1 液相色谱梯度洗脱条件
2.2 质谱条件：
a) 液相色谱-质谱联用仪；
b) 离子源：电喷雾离子源（ESI)；
c) 检测方式：多反应监测（MRM)；
d) 扫描方式：正离子模式；
e) 离子源温度：500℃；
f) 喷雾电压：5500 V；
表2-2 待测目标化合物定性、定量离子对及电压参考条件
三、实验谱图
3.1 牛奶基质谱图：
图3-1 牛奶基质空白谱图
图3-2 牛奶基质标准溶液（20 μg/L）谱图
图3-3 牛奶基质高水平加标（20 μg/L）谱图
3.2 奶粉基质谱图：
图3-4 奶粉基质空白谱图
图3-5 奶粉基质标准溶液（100 μg/L）谱图
图3-6 奶粉基质高水平加标（100 μg/L）谱图
四、实验数据
4.1标准曲线：
表4-1 待测目标物基质标准曲线
4.2加标回收率数据：
表4-2 牛奶和奶粉基质加标回收率（n=3）
五、实验结论
外标法处理数据，牛奶和奶粉两种基质中阿维菌素类药物的标准曲线线性方程均线性良好，R2 > 0.995。在高、低水平下加标回收率均在70%—120%范围内，满足国标实验要求。
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