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PNA寡核苷酸处理方案

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2024/8/8 17:55:50

1.PNA具有较高的亲和力和特异性。

2.富含嘌呤的PNA低聚物的溶解度降低,并倾向于聚集。建议低聚物的嘌呤含量低于50%,在PNA夹中一个低聚物的嘌呤(特别是G碱段不超过6段),因为水溶性非常重要。可以添加两个赖氨酸来提高长PNA或具有高嘌呤的PNA的溶解度。

存储 和 处理

1.PNA作为冻干粉(超过5年)或作为水中溶液(至少一年)储存起来非常稳定-20°或更低。对于长期存储,-70°

2.当准备使用时,向下旋转试管,将50n摩尔的PNA溶解在1 ml无菌水中,制成50 uM的原液。涡旋和混合良好,以

实现*全溶解。

3.平均分配和储存在-20°或-70°工作原液可以进一步稀释10倍(5毫米,10倍),并在4度下保存几周。

4.当PNA解冻时,加热至55°中浸泡5分钟,以实现*全溶解。

PCR 反应

*下面是一个例子。实际情况可能根据序列而变化,需要根据经验来确定。

1.准备以下PCR混合。

a.25 ul 2x PCR混合物

b.FW和RV PCR引物分别为最终0.2 uM

c.5 ul PNA钳夹(5 uM库存)至最终0.5uM(范围:0.2~5 uM)

d.DNA模板: 20 ng(10~50 ng)

e.水至50 ul

2.按如下方法运行PCR程序。

a.变性:94 3 min

b.放大(22~40循环)

i.变性:94 30 sec

ii.PNA夹具:65~75为20秒(比PNA工具计算的Tm低5~10度)

iii.底漆退火:55~65为20秒

iv.扩展:68为30秒

c.扩展:72, 10 min

d.保持在4

3.取5ulPCR产物,在琼脂糖凝胶上运行。

4.夹紧反应中最常见的PNA浓度为0.4~2 uM。一般来说,如果溶解度不受影响,更高浓度的PNA可以提供更好的夹紧效果。


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