1. 打开试剂盒,对照说明书逐一取出各个试剂,了解各试剂的状态和规格。
2. 通读说明书,准备好实验所需仪器、用具(酶标仪/分光光度计;金属浴/水浴锅;涡旋振荡仪;96孔板/1mL比色皿等)。
提示:建议在试验前通读一遍说明书,了解实验注意事项,提前设置好实验所需温度。
3.进行样本采集和存储。生化试剂盒实验多数为酶活测定或含量测定实验,采集后的样本建议在-20℃以下低温保存。
4.按照说明书进行样本前处理,详细的样本处理步骤大家可以参考B站上我们样本前处理的视频。
提示:提取后的样本上清液建议在当天使用完,现用现配(反复冻融会影响样本酶活或含量)。
提示:为确保反应进行,建议按照说明书加样表依次加入各个试剂,(有些试剂盒加样顺序可能会影响反应)。
6.依次加入各个试剂后建议充分混匀,以确保显色反应完。
提示:为确保显色反应完,必须保证反应温度和反应时间准确,注意是否为避光实验。
7.反应结束后,在酶标仪或分光光度计上进行测定,并按照说明书计算公式进行计算、分析。
提示:反应结束后应立即测定,有些试剂盒反应结束后需要在短时间内进行测定,时间过久可能会影响实验结果。
1. 实验前,建议通读说明书,了解实验各个步骤,并挑选2-3个样本进行预实验。
2. 实验前确定使用的仪器用具,如玻璃比色皿/石英比色皿;96孔普通版/96孔UV板/96孔石英板(尤其注意最终反应液溶剂是否为有机试剂,是否可用塑料材质的96孔板)。
3. 实验前按照说明书溶液的配制,将各个试剂进行充分溶解,-20℃保存的试剂建议分装后保存,避免反复冻融;现配现用的试剂,建议根据样本量进行计算后配制使用。
4. 如果样本吸光值超过线性范围,可以增加样本量、延长反应时间或者稀释样本后再进行测定,注意同步修改计算公式。
5. 如需按照蛋白浓度进行计算,建议查看说明书注意事项,确定本试剂盒提取的上清液是否可以用于蛋白浓度测定,若提取液中含有蛋白质沉淀剂或前处理过程使蛋白变性,需另取样本测定蛋白浓度。
6. 若样本量过多,建议分批次进行实验;连续几天进行测定时,确保试剂、仪器和操作步骤一致,避免仪器和人工误差。
提示:各个试剂盒因实验原理,测定方法各有差异,建议实验前认真阅读该试剂盒的注意事项。