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MLPA试验原理

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2024/8/12 10:48:38


MLPA技术,即多重连接探针扩增技术,于2002年首先报道,是近几年发展起来的一种针对待检DNA序列进行定性和半定量分析的新技术。该技术高效、特异,在一次反应中可以检测45核苷酸序列拷贝数的改变,已经应用于多个领域、多种疾病的研究。下面让我们一起来看看MLPA技术的试验原理吧!

MLPA实验中,纯化的样本DNA被变性。后用MLPA探针寡核苷酸孵育过夜。每个MLPA探针都具有针对特定基因组序列的探针。每对MLPA探针包括两条单链DNA:左侧探针和右侧探针寡核苷酸。简称分别是LPORPOLPORPO包含PCR引物和DNA杂交序列。

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MLPA反应中,左探针寡核苷酸(LPO)和右探针寡核苷酸(RPO)都与靶序列进行杂交,之后使用连接酶连接两部分探针。

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将杂交的探针寡核苷酸连接到邻近的目标序列。探针连接产物的数量是样品中目标序列数量的度量。连接反应具有高度特异性连接部位周围有错配。

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使用单个通用引物对在多重PCR中扩增连接的探针。只有连接的探针呈指数级扩增,使得不需要去除未连接和未连接的探针。

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再通过毛细管电泳进行片段分离,通过MRC Holland分析软件进行分析得出结论。PCR产物装载到毛细管电置上,按长度分离。每个片段对应一个特定的MLPA探针。

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MLPA结合了DNA探针杂交和PCR技术,不仅可以用来检测与疾病相关的CNV(‌拷贝数变异)‌,‌例如遗传性乳腺癌、‌结肠癌、‌杜氏肌营养不良等,‌还可以用于肿瘤中的CNV检测,‌以优化肿瘤分型。任何技术都有其优缺点。

优点:

1、高效:一次反应可以检测45个靶序列拷贝数的改变。

2、特异:可以检测点突变。

3、快速:一次实验可以在24小时内完成。

4、简便:不同的试剂盒操作基本相同,容易掌握。

缺点:

1、需要精确测量DNA的浓度,样本容易被污染。

2、不能用于单个细胞的检测。

3、MLPA用于检测基因的缺失或重复,不适合检测未知的点突变类型。

4、不能检测染色体的平衡易位。


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