诱导多能干细胞（iPSC）的研究和应用正日益成为生物医学领域的重要方向。然而，iPSC的培养过程中存在诸多不确定性，因此，进行规律性的质量控制（ QC）对于确保实验的可靠性、降低成本和提高效率至关重要。国际干细胞研究学会（ISSCR）提供了一系列指导原则和建议，本文将围绕iPSC QC 的三个关键点：基本因素、功能性验证和基因组稳定性，探讨何时进行QC检测以及如何实施。
一、iPSC QC的关键点
iPSC QC（诱导多能干细胞质量控制）的关键点主要包括以下三个方面：
1. 基本因素：这些因素是评估iPSC质量的基础，包括：
- 细胞是否污染：检查细胞培养物中是否存在细菌、真菌、支原体等外来污染。
- STR类型：通过短串联重复序列分析来确认细胞株的遗传身份，确保其来源的准确性。
- 生长速度：监测细胞的增殖速率，以评估其生长活力。
- 细胞形态：观察细胞的大小、形状和排列，以判断其正常性。
2. 功能性验证：这些测试确保iPSC具有正常的生物学功能，包括：
- 基因表达分析：通过RT-PCR、基因芯片等技术，检测iPSC中特定基因的表达水平。
- 分化潜能：评估iPSC分化为三种胚层细胞的能力，以及是否能形成功能性细胞类型。
3. 基因组稳定性：这些分析确保iPSC的遗传稳定性，包括：
- 拷贝数变异（CNV）分析：检测细胞基因组中的拷贝数变化，这些变化可能导致基因功能的改变。
- 单核苷酸变异（SNV）分析：识别基因组中的单点突变，这些突变可能影响细胞的功能。
- 基因编辑正确性及脱靶效应评估：对于经过基因编辑的iPSC，检查编辑是否准确以及是否存在非特异性的脱靶效应。
二、iPSC QC检测的时机
l 重要项目开始前：在项目启动前进行QC检测，可以确保使用的iPSC质量合格，避免后续实验的无效投入。
l iPSC编辑或冻存后：编辑或冻存过程可能影响iPSC的质量，因此在这些操作后进行QC检测十分必要。
l 细胞培养异常时：当细胞培养过程中出现表型改变或实验重复性差时，应及时进行QC检测，以发现问题所在。
三、IPCS基因组突变的QC策略
突变风险：研究显示，iPSC细胞株有20%-30%的概率发生基因突变，这些突变可能随着传代次数的增加而加剧，对实验结果产生严重影响。
筛选时机：为了及时发现突变并降低成本，建议在iPSC还未进行重编程和基因改造的野生型（WT）时期进行筛选。
高效铺板方法：在需要大量样本的情况下，手动铺板不现实。采用安达望的VIPS高效率细胞铺板系统结合CMX系统细胞检测系统进行单克隆筛选和生长追踪，可以提高效率。
克隆恢复率：通过培养基的优化，可以使克隆恢复率达到最高70%，确保筛选过程的效率。
l基因分析：选取单克隆来源且形态符合要求的克隆团进行基因分析，排除突变细胞株，从源头避免突变带来的风险。
iPSC的培养和应用潜力巨大，但随之而来的质量控制问题也不容忽视。通过遵循ISSCR的指导原则，我们可以在适当的时机进行有效的QC检测，确保iPSC的质量和稳定性。特别是在基因组突变方面，通过早期筛选和高效的单克隆筛选技术，我们可以减少突变风险，提高实验的可靠性和效率。随着iPSC技术的不断进步，未来还将出现更多高效、精确的QC方法，为iPSC的研究和应用提供更强有力的支持。
安达望的VIPS高效率细胞铺板系统结合CMX系统细胞检测系统进行单克隆筛选和生长追踪，可以提高效率。更多实验室仪器，实验耗材，细胞生长试剂可以进入苏州阿尔法生物实验器材有限公司进行了解。
