本公司研制的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳低分子量标准蛋白质,使用方便,效果尤佳。其分子量范围是14400~97400道尔顿。
成分:
成分 分子量(道尔顿) 含量(μg/支)
兔磷酸化酶B/Rabit phosphorglase B 97400 40
牛血清白蛋白/Bovine serum Albumin 66200 40
兔肌动蛋白/Rabbit actin 43000 40
牛碳酸酐/Bovine carbonic anhydrase 31000 40
胰蛋白酶抑制剂/Trypsin inhibitor 20100 40
鸡蛋清溶菌酶/Hen egg white lysozyme 14400 40
本产品规格:冻干粉(20次/支)
使用方法:
1、 将冻干粉产品先加200ul重蒸水溶解,再加等体积的2倍样品缓冲液混匀。在沸水浴中变性3-5分钟,分装20ul/支,入-20℃保存。使用时取一支即可上样。
2、 应经常规SDS-PAGE电泳后,用考马斯亮蓝R-250或G-250(coomassie blue R-250 or G250)染色。可得分布均匀、密度相同的6个蛋白质条带
3、 银染法:将本品以1倍样品缓冲液稀释40-50倍后分装(8ul/支)、-20℃保存。使用前取一支,100℃水浴3-5分钟即可上样。经常规SDS-PAGE后银染,可得分布均匀的6个蛋白质条带。
建议使用分离胶:14%(T)。
表-2倍样品缓冲液配制:
试剂名称 成分 含量/浓度 配制方法
2倍样品
缓冲液 0.5M Tris-HCI,PH6.8 2.0ml 以上溶液混合后加双蒸水2.5ml至10.0ml,可适当调整溴酚蓝的用量以保证电泳时的*指示
丙三醇(甘油) 2.0ml
20%SDS 2.0ml
0.1%(w/v)溴酚蓝 0.5ml
2-b-巯基乙醇 1.0ml
Reagents for SDS Gels
A. 4×Lower gel buffer pH8.8
1.5M Tris 90.83g
0.4%(w/v)SDS 2.00g
dd H2O to 500ml
用浓HC1调PH至8.8
B. 4×Upper gel buffer pH6.8
0.5M Tris 12.11g
0.4%(w/v)SDS 0.8g
dd H2O to 200ml
用浓HC1调PH至6.8
C. 30% Acrylamide regular
29.2%(w/v)acrylamide 29.2g
0.8%(w/v)Bis-acrylamide 0.8g
dd H2O to 100ml
加热使acrylamide*溶解,冷却后加Bis混合溶解后定容,用滤纸过滤,装棕色瓶
D. 10×Running buffer
0.25M Tris 30.3g
1.92M Gly 144.1g
1.0%(w/v)SDS 10.0g
dd H2O to 100ml
(无需调PH)PH即为8.2-8.3
分离胶 总体积12ml 单位:ml 浓缩胶
5% 7% 10% 11.5% 12% 13.5% 14% 15% 5%
dd H2O 7 6.2 5 4.4 4.2 3.6 3.4 3 dd H2O 4.06
4×lower 3 3 3 3 3 3 3 3 4×Up 1.68
30%Acr 2 2.8 4 4.6 4.8 5.4 5.6 6 30%Acr 1
100%TEMED 10ul 10ul 10ul 10ul 10ul 10ul 10ul 10ul 100%TEMED 5ul
10%AP 100ul 100ul 100ul 100ul 100ul 100ul 100ul 100ul 10%AP 50ul
附图一:SDS-PAGE 低分子量标准蛋白质考马斯亮蓝R-250染色结果
兔磷酸化酶B 97400道尔顿
牛血清白蛋白 66200道尔顿
兔肌动蛋白 43000道尔顿
牛碳酸酐 31000道尔顿
胰蛋白酶抑制剂 20100道尔顿
鸡蛋清溶菌 14400道尔顿