关键词：菌种复壮 纯种分离 宿主复壮 病毒 寄生微生物 诱变 基因突变 淘汰 菌丝顶端分离 培养基 无菌操作
菌种复壮指通过淘汰衰老、死亡、变异的细胞来挑选具有优良性状的细胞，以此来恢复菌种原有优良性状和活力的过程。常用方法有纯种分离法、宿主复壮法、诱变法、淘汰法等。针对不同类型的菌种和复壮目的，可以采用多种方法。
一、纯种分离法
纯种分离法是目前应用广泛的菌种复壮方法之一，通过挑取单个性状优良的菌落并进行多次分离培养，以去除混杂在菌种中的衰老、死亡和变异的细胞，从而筛选出具有优良性状的菌种，以达到复壮的目的。
操作步骤如下：
1.准备：无菌环境下，在超净工作台上用无菌接种针或接种环从需要复壮的菌种中挑取一个性状优良的单菌落。
2.分离：在准备好的培养皿上划线分离，注意划线手法，确保成熟后的菌落便于后续挑选。操作结束后将培养皿放在适宜的环境中培养。
3.挑选：待菌落生长成熟后，于超净工作台上挑选外观、颜色、形态优良的菌落，进行下一次划线分离。
4.重复操作：重复数次上述操作至分离出性状优良的纯种菌落。
此外，纯种分离法还包括稀释平板法、涂布平板法等多种方式，可以根据菌种特性和实验条件选择适合的方法来达到复壮菌种的目的。
图示为划线分离法
二、宿主复壮法
宿主复壮法适用于病毒、立克次氏体等细胞内寄生的微生物。通过将待复壮的菌种接种到昆虫或植物的宿主细胞内，利用宿主细胞内复杂的代谢环境，提高菌种的活力，从而达到复壮的目的。
操作步骤如下：
1.准备：准备昆虫或植物的宿主细胞，在无菌条件下将宿主细胞接种到适宜的培养基上。
2.寄生：将病毒等需要复壮的微生物接种到宿主细胞内，使其寄生并感染宿主细胞。
3.挑选：培养一段时间后，观察宿主细胞的病变程度，从病变程度严重或已病死的宿主细胞内分离出典型菌株再次感染健康的宿主细胞。
4. 重复操作：重复上述操作至菌种活力得到提高。
图示为病毒寄生宿主细胞
三、诱变法
通过物理或化学因素使菌种发生基因突变，从而筛选出具有优良性状的菌株。诱变法存在一定的风险，可能会导致菌种发生不可逆的突变，使用时需注意诱变剂的剂量或辐射时间。
操作步骤如下：
1.准备：准备好需要复壮的菌种培养基，选择合适的诱变剂，如紫外线、抗生素等。
2.诱变：使用诱变剂处理培养基，使菌种发生基因突变。
3.挑选：将培养基放在适宜的环境中至培养结束，无菌环境下挑选出具有优良性状的突变株进行复壮。
图示为用紫外线处理培养皿
四、淘汰法
淘汰法通过对衰退的菌种进行处理，如高温、低温的培养环境，低营养的培养基等，淘汰菌种中的衰老、死亡和变异的细胞，从而筛选出适应力强、有活力的细胞。淘汰法可以有效去除衰退个体，增强菌种的优良性状。
操作步骤如下：
1.准备：无菌环境下，将待复壮的菌种接种到低营养的培养基上，或接种到正常的培养基上放在高温或低温环境中培养。
2.挑选：培养周期结束后，在超净工作台上挑选出适应力强、有活力的菌落进行下一步的复壮操作。
图示为通过调节温度改变培养环境
五、其他方法
1.菌丝顶端分离：无菌环境下挑取健壮菌丝体的顶端部分进行纯化培养，以恢复菌种原有的优良性状。此方法适用于不产孢子的丝状菌。
2.适当更换培养基：在菌种传代培养中适当改变培养基成分，以刺激菌丝生长，提高菌种活力。
3.定期进行菌种分离：对生产中应用的菌种每1-2年进行一次分离复壮，以保持菌种的优良性状和活力。
六、注意事项
1.复壮前需对菌种进行鉴定，保证菌种的纯度。
2.复壮操作过程中要注意无菌操作，避免培养基或菌种被杂菌污染，保证菌种正常生长。
3.应对复壮后的菌种进行性能评价，确保其具有稳定的优良性状。
综上所述，菌种复壮是一个综合性的过程，需要根据具体情况选择合适的方法并按操作规范严格执行。通过菌种复壮，可以恢复菌种原有的生命活力，提高菌种的生长和代谢速度，为发酵生产、科学研究等提供具有优良性状的菌种。
