非蛋白质巯基含量检测试剂盒（可见分光光度法）
产品货号：BA1095
产品规格：50管/24样
产品简介：
生物体内巯基主要包括非蛋白质巯基和蛋白质巯基。巯基化合物在体内具有重要的解毒功能，对生物体的自 我调节具有非常重要的生理意义。
巯基基团与5,5’-二硫代-双-硝基苯甲酸（DTNB）反应，生成黄色化合物，在412nm处有最大吸收峰。
技术指标：
检出限：0.0007μmol/mL
线性范围：0.003125-0.3μmol/mL
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。
产品内容：
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液一 | 液体25mL×1瓶 | 2-8℃ |
提取液二 | 液体25mL×1瓶 | 2-8℃ |
试剂一 | 液体50mL×1瓶 | 2-8℃ |
试剂二 | 粉剂×1瓶 | 2-8℃ |
标准品 | 粉剂×1支 | 2-8℃ |
溶液的配制：
1. 提取液的配制：将提取液一和提取液二按体积比1：1的比例混合配制，按照样本数量配制并在当天用完；
2. 试剂二：临用前加入5mL无水甲醇充分溶解备用；
3. 标准品：10mg半胱氨酸，临用前加入1.65mL提取液溶解为50µmol/mL的半胱氨酸标准溶液。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、离心机、恒温水浴锅、1mL玻璃比色皿、甲醇、研钵/匀浆器和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1. 动物、植物组织：称取约0.1g，加入1mL的提取液，制备成10%的匀浆，10000g，常温离心10min，取上清待测。
2. 细胞或细菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）然后10000g，常温离心10min，取上清置冰上待测。
3. 血清（浆），培养液：向0.1mL血清（浆）或培养液中加入1mL提取液，10000g，常温离心10min，取上清待 测。
二、测定步骤
1. 分光光度计预热30min以上，调节波长至412nm，蒸馏水调零。
2. 标准品的制备：将50μmol/mL标准溶液用提取液稀释至0.3、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125 μmol/mL的标准液，现用现配。
3. 操作表：
对照管 | 测定管 | 标准管 | 空白管 | |
上清液（mL） | 0.3 | 0.3 | - | - |
标准品（mL） | - | - | 0.3 | - |
试剂一（mL） | 0.65 | 0.65 | 0.65 | 0.65 |
试剂二（mL） | - | 0.1 | 0.1 | - |
H2O（mL） | 0.1 | - | - | 0.4 |
混匀，室温放置10min，测定412nm吸光值，分别记为A对照、A测定、A标准、A空白，计算ΔA 测定=A测定-A对照，算ΔA标准=A标准-A空白。 | ||||
二、计算公式
1. 标准曲线的绘制： 以标准液浓度为x轴，ΔA标准为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将ΔA测定代入公式得到x（μmol/mL）。
2. 非蛋白质巯基含量计算：
（1）按样本质量计算
非蛋白质巯基含量（µmol/g 质量）=x×V提取÷W=x÷W
（2）按血清、培养液体积计算
非蛋白质巯基含量（µmol/mL）=x×（V提取+V液体）÷V液体=11×x
（3）按细胞数量计算
非蛋白质巯基含量（μmol/104cell）=x×V提取÷500=0.002×x
V提取：加入提取液体积，1mL；W：样本质量，g；Cpr，样本蛋白浓度，mg/ml；500：500万个细胞；V液体：血清（浆）或培养液体积，0.1mL。
注意事项：
如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。
非蛋白质巯基含量检测试剂盒（可见分光光度法）
产品货号：BA1095
产品规格：50管/24样
产品简介：
生物体内巯基主要包括非蛋白质巯基和蛋白质巯基。巯基化合物在体内具有重要的解毒功能，对生物体的自 我调节具有非常重要的生理意义。
巯基基团与5,5’-二硫代-双-硝基苯甲酸（DTNB）反应，生成黄色化合物，在412nm处有最大吸收峰。
技术指标：
检出限：0.0007μmol/mL
线性范围：0.003125-0.3μmol/mL
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。
产品内容：
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液一 | 液体25mL×1瓶 | 2-8℃ |
提取液二 | 液体25mL×1瓶 | 2-8℃ |
试剂一 | 液体50mL×1瓶 | 2-8℃ |
试剂二 | 粉剂×1瓶 | 2-8℃ |
标准品 | 粉剂×1支 | 2-8℃ |
溶液的配制：
1. 提取液的配制：将提取液一和提取液二按体积比1：1的比例混合配制，按照样本数量配制并在当天用完；
2. 试剂二：临用前加入5mL无水甲醇充分溶解备用；
3. 标准品：10mg半胱氨酸，临用前加入1.65mL提取液溶解为50µmol/mL的半胱氨酸标准溶液。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、离心机、恒温水浴锅、1mL玻璃比色皿、甲醇、研钵/匀浆器和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1. 动物、植物组织：称取约0.1g，加入1mL的提取液，制备成10%的匀浆，10000g，常温离心10min，取上清待测。
2. 细胞或细菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）然后10000g，常温离心10min，取上清置冰上待测。
3. 血清（浆），培养液：向0.1mL血清（浆）或培养液中加入1mL提取液，10000g，常温离心10min，取上清待 测。
二、测定步骤
1. 分光光度计预热30min以上，调节波长至412nm，蒸馏水调零。
2. 标准品的制备：将50μmol/mL标准溶液用提取液稀释至0.3、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125 μmol/mL的标准液，现用现配。
3. 操作表：
对照管 | 测定管 | 标准管 | 空白管 | |
上清液（mL） | 0.3 | 0.3 | - | - |
标准品（mL） | - | - | 0.3 | - |
试剂一（mL） | 0.65 | 0.65 | 0.65 | 0.65 |
试剂二（mL） | - | 0.1 | 0.1 | - |
H2O（mL） | 0.1 | - | - | 0.4 |
混匀，室温放置10min，测定412nm吸光值，分别记为A对照、A测定、A标准、A空白，计算ΔA 测定=A测定-A对照，算ΔA标准=A标准-A空白。 | ||||
二、计算公式
1. 标准曲线的绘制： 以标准液浓度为x轴，ΔA标准为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将ΔA测定代入公式得到x（μmol/mL）。
2. 非蛋白质巯基含量计算：
（1）按样本质量计算
非蛋白质巯基含量（µmol/g 质量）=x×V提取÷W=x÷W
（2）按血清、培养液体积计算
非蛋白质巯基含量（µmol/mL）=x×（V提取+V液体）÷V液体=11×x
（3）按细胞数量计算
非蛋白质巯基含量（μmol/104cell）=x×V提取÷500=0.002×x
V提取：加入提取液体积，1mL；W：样本质量，g；Cpr，样本蛋白浓度，mg/ml；500：500万个细胞；V液体：血清（浆）或培养液体积，0.1mL。
注意事项：
如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。
