在继续介绍鲤鱼卵黄蛋白原ELISA试剂盒的操作步骤时，我们需格外注意每一步的精确执行，以确保实验结果的准确性和可靠性。
**步骤四：加样**
在完成标准品和样本的稀释后，使用微量移液器小心地将各浓度的标准品和待测样本分别加入酶标板孔底部，避免触及孔壁，以减少误差。每孔加入量需严格按照说明书指示操作，通常为50-100微升。加样完毕后，轻轻晃动酶标板，使液体充分混匀，但避免产生气泡。
**步骤五：孵育**
将加好样的酶标板置于恒温培养箱或摇床上，设定适当的温度（通常为37°C）和孵育时间（如30分钟至1小时），让样本中的抗原与包被在板上的抗体充分结合。孵育期间，避免酶标板受到震动或温度变化的影响。
**步骤六：洗涤**
孵育结束后，小心去除孔内液体，注意不要触及孔底。随后，向每孔加入洗涤液，充分洗涤以去除未结合的成分。洗涤次数和洗涤液的体积需遵循说明书指导，一般需重复洗涤3-5次，每次洗涤后需吸干孔内残留液体。
**步骤七：加酶标抗体**
洗涤完成后，向每孔加入适量的酶标抗体。酶标抗体能够特异性识别与板上抗体结合的抗原，形成抗原-抗体-酶标抗体复合物。同样地，加入后需轻轻晃动酶标板使液体混匀，并置于恒温条件下孵育一定时间，让酶标抗体与抗原充分结合。
至此，鲤鱼卵黄蛋白原ELISA试剂盒的主要操作步骤已近尾声，接下来的步骤将涉及显色反应和结果判定，这些步骤同样关键，将直接决定实验的最终结果。请继续按照说明书仔细操作，确保实验顺利完成。
