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酶标抗体的质量鉴定与保存

上海沪宇生物科技有限公司

2012/4/18 10:35:38

1. 酶活性和抗体效价测定

采用双向免疫扩散法(稀释抗体)和DAB-H2O2 显色反应检测结合物中抗体效价和免疫沉淀线中的酶促反应。

2. 酶量和IgG量

酶量(mg/ml)=OD403 ′0.4

IgG量(mg/ml)=(OD280- OD402 ′0.42)′0.94′0.62

其中,0.42为酶蛋白本身(0.3)及结合戊二醛后增加的OD值,0.94为抗体蛋白与醛化酶结合后,OD280 约增加6%,故乘以0.94。兔IgG的OD280 =1.0时为0.62.

过碘酸钠标记法IgG量(mg/ml)=(OD280- OD402 ′0.3)′0.94′0.62

标记率= OD403 / OD280 =0.3-0.6,即一个抗体分子上结合1-2个HRP分子.标记率可以大于0.6-0.9。OD403 / OD280 =0.4,约相当于E/P=1.0。

酶标抗体的保存

经鉴定合格的酶标抗体,由于硫化物及叠氮化物等可与酶结合,使HRP失活,因此,不能用硫化物及叠氮化物作为防腐剂,可加入等量的60%甘油,小量分装(0.5ml/支),置4℃~-30℃保存。
 

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