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是一种广泛用于基础科学研究、临床应用研究和诊断的免疫学测定方法。ELISA 技术依赖于抗原(即靶蛋白)与针对目标抗原的“一抗”之间的相互作用。抗原的存在通过添加底物的酶联抗体催化来确认,其产物可以通过目视检查定性检测,或使用光度计或分光光度计的读数进行定量检测。
今天和大家分享一下Elisa实验中标准曲线的绘制方法:
可以使用各种绘图软件绘制ELISA标准曲线。下面以“Curve Expert1.3”软件为例,ELISA标准曲线的绘制方法如下:(“Curve Expert1.3”软件可以联系Biorbyt中国办事处获取)
2. 在X轴上输入标准品的OD值(双抗体夹心输入OD-blank值),在Y轴上输入对应的浓度值,如图所示:
3. 单击按钮出现如下对话框:
5. 在*一个对话框的右上角出现一些曲线的名称。从“1”开始,依次点击曲线名称,右下角会出现对应的拟合曲线。(一般选择*一个多项式拟合)
6. 根据拟合曲线选择ELISA拟合度*佳的曲线,双击,出现如下对话框:注意:选择系数(即“r”值)*佳的曲线方程进行运算。在下面的对话框中,右上角有一个“r”值。“r”值越接近 1,拟合度越好。
7. 按[Ctrl]键+[L]键,出现如下对话框:
8. 输入标准的OD值,点击【Calculate】,即可得到待测蛋白质的实际含量(样品稀释N次,则计算值再乘以N)。9. 如果想要获取ELISA拟合曲线的方程,请在步骤6中对话框的空白处单击鼠标右键,然后选择“Information”
Rational Function: y=(a+bx)/(1+cx+dx^2)
Coefficient Data:
a = -5.9369973
b = 166.94422
c = 1.8471095
d = -0.86731519
11.修改绘图的 X、Y 轴的相关属性。选择步骤9所示图中的第二行“Graph Properties”,修改后点击确定保存。