圆二色光谱仪是一种用于测定手性分子光学活性的精密仪器，广泛应用于生物大分子结构分析等领域。为确保其测量结果的准确性和可靠性，定期进行校准是至关重要的。以下是对圆二色光谱仪校准方式的描述：
1. 光源强度校准
- 目的：确保光源发出的光强在长时间使用后依然稳定，避免因光源老化导致的测量误差。
- 方法：使用标准光强计或已知光强的参考物质，比较当前读数与预期值，调整至标准水平。
2. 波长准确性校准
- 重要性：波长的微小偏差会直接影响到CD谱图的形状和峰值位置，对于识别特定结构的蛋白质等生物大分子至关重要。
- 步骤：采用具有已知特征吸收峰的标准溶液(如苯丙氨酸)，记录其CD光谱，对比标准谱图，调整直至吻合。
3. 光学系统对准
- 概述：包括光源、单色器、样品室及检测器的光路精确对准，任何偏离都会影响信号的收集效率和准确性。
- 操作：通过调整光路中的透镜和反射镜位置，优化光通量，通常结合软件辅助完成精细调节。
4. 基线校正
- 原理：去除背景噪声和溶剂本身对CD信号的贡献，确保得到的是纯粹的样品信息。
- 实践：扫描空白溶剂(无样品)的CD谱作为基线，从后续样品谱图中扣除此基线。
5. 温度控制
- 必要性：温度变化会影响样品的二级结构和稳定性，尤其是蛋白质等敏感生物样品，因此精确控温是必须的。
- 措施：使用恒温水浴或Peltier元件控制样品室温度，定期校准温控系统以确保设定值与实际值一致。
6. 样品浓度验证
- 考量：样品浓度过高可能导致信号饱和，过低则信噪比下降，影响数据质量。
- 策略：通过预实验确定最佳浓度范围，或使用紫外-可见分光光度计预先测定样品吸光度，指导CD实验的样品准备。
7. 软件校准与数据处理
- 功能：软件不仅用于控制仪器运行，还需进行数据平滑、去噪、单位转换等后期处理，确保最终结果的准确性。
- 更新与维护：定期检查软件版本，利用最新的算法和数据库进行数据处理，同时备份原始数据以防丢失。
8. 周期性全面校验
- 频率：根据仪器使用频率和制造商建议，每年至少进行一次全面的校准和维护。
- 内容：涵盖上述所有方面，加上机械部件的清洁和润滑，确保仪器处于最佳工作状态。
9. 用户培训与操作规范
- 重要性：操作人员的技能和经验直接影响到校准的效率和效果，以及对异常情况的判断能力。
- 实施：定期组织专业培训，学习最新的操作规程和故障排除技巧，保持高水平的操作一致性。
