50×TAE缓冲液的用途与配制方法及使用注意事项！

50×TAE缓冲液的用途与配制方法及使用注意事项！

一、知识背景

50×TAE缓冲液是分子生物学实验中常用的核酸电泳缓冲液，特别是在DNA或RNA的琼脂糖凝胶电泳中发挥着重要作用。50×TAE缓冲液是一种常用于核酸电泳的缓冲系统，由Tris-acetate和EDTA组成。TAE的全称为四胺四乙酸，其化学名称为N-[2-羟基-1，2-乙二胺基]-三乙酸，分子式为C10H14N2O8，分子量为290.24。TAE缓冲液主要用于DNA的提取、纯化和检测过程中的电泳分离。

在DNA提取过程中，TAE缓冲液可以有效地稳定DNA，防止其降解。同时，由于其较低的离子强度和较高的pH值（约为8.3），TAE缓冲液可以有效地抑制DNA酶的活性，从而保护DNA免受降解。此外，TAE缓冲液还常用于RNA的提取和纯化过程中的电泳分离。

二、基本信息

中文名称：50×TAE缓冲液

英文名称：50×TAE Buffer

主要成分：三羟甲基氨基甲烷(Tris base)、乙酸(acetic acid)、乙二胺四乙酸(EDTA)

作用：在凝胶电泳中维持合适的pH，使溶液具有一定的导电性，以利于DNA或RNA分子的迁移

三、特点与用途

广泛应用：TAE缓冲液是生物学中使用泛的核酸电泳缓冲液之一。

迁移率快：双链线状DNA在TAE缓冲液中的迁移率较其他缓冲液快约10%。

分离效果好：电泳大于13kb的DNA片段时，TAE缓冲液能取得更好的分离效果。

回收方便：回收DNA片段时也易用TAE缓冲系统进行电泳。

四、配制方法

50×TAE缓冲液的配制方法如下（以配制1L为例）：

称量Tris 242g，Na2EDTA·2H2O 37.2g于1L烧杯中。

向烧杯中加入约600ml去离子水，充分搅拌溶解。

加入57.1ml的冰乙酸，充分搅拌。

加去离子水定容至1L后，室温保存。

五、使用注意事项

稀释使用：50×TAE缓冲液为浓缩液，工作浓度为1×，使用前需用蒸馏水或超纯水稀释50倍。

保存条件：常温运输和保存，有效期一般为12个月。

沉淀处理：若产品出现沉淀析出，可置于37℃水浴中使其溶解，不影响使用。

更换工作液：由于TAE缓冲液的缓冲容量较小，建议及时更换工作液，长时间电泳（如过夜）时不可选用，除非有循环装置使两极的缓冲液得到交换。

六、应用

50×TAE缓冲液可以用于HIV-1新重组株CRF55＿01B的T细胞表位变异特征研究：

研究通过横断面分析比较CRF55＿01B与当前主要流行的CRF01＿AE、B、CRF07＿BC亚型毒株在病毒Gag、Pol、Nef蛋白的T细胞表位的变异,尤其是已知具有明确保护作用的HLA限制性T细胞表位的变异情况,分析氨基酸变异对病毒复制能力的影响,并明确CRF55＿01B亚型病毒二代重组断点与氨基酸多态性及T细胞应答的关系,以此解析CRF55＿01B亚型病毒的生物学特点,并为疾病进展评价及免疫治疗奠定基础。

研究方法：

1、研究对象本研究选取深圳市2015-2020年基因型耐药检测确定为CRF01＿AE、CRF07＿BC、CRF55＿01B和B亚型病毒的新诊断199例HIV感染者,经Western Blot确认HIV感染,纳入研究时未服用过抗逆转录病物,通过亲和力实验判定为近期感染（6个月内）。收集感染者血浆标本,血浆-80℃冷冻。本项目招募的所有参与者均获得书面知情同意书。

2、血浆HIV-RNA提取和gag、pol、nef全长基因巢式PCR扩增根据QIAamp Viral RNAMini Kit试剂盒的说明书从血浆中提取HIV-RNA。采用自行设计引物巢式PCR扩增方法进行gag、pol、nef基因片段扩增。

3、PCR产物的鉴定及测序使用50×TAE缓冲液配制1.0%琼脂糖凝胶,根据gag、pol、nef基因片段大小选择2000bp、10000bp DNA ladder作为定量Marker,每孔加5μl的第二轮PCR产物,120V的电压下电泳30 min。在Ultra-Violet Product凝胶分析系统紫外模式下观察有无目的条带。获得目的条带的PCR产物由华大基因公司（中国）直接测序。

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