一、WB实验中的磷酸酶抑制剂的作用
细胞或组织裂解时会释放出大量内源性蛋白磷酸酶，以各种方式催化磷酸化蛋白的去磷酸化，从而影响后续的蛋白检测。因此在提取物中适量添加外源性磷酸酶抑制剂，有利于在之后的Western blotting、免疫共沉淀检测磷酸化蛋白质和蛋白激酶活性测定等实验过程中抑制磷酸化蛋白的去磷酸化，维持蛋白质的磷酸化状态。
二、WB实验中的磷酸酶抑制剂的作用原理
在细胞信号转导中，靶蛋白会被可将磷酸基团转移到特定位点的蛋白激酶磷酸化。这些磷酸基团在细胞裂解时会被内源性蛋白磷酸酶去除。磷酸酶抑制剂有助于在细胞裂解和蛋白质提取过程中保持磷酸蛋白的活性和状态。
三、常用的磷酸酶抑制剂的分类
常见的磷酸酶有蛋白酪氨酸磷酸酶、碱性磷酸酶和酸性磷酸酶，常用的磷酸酶抑制剂如下：
1. 氟化钠（sodiμm fluoride）：酸性磷酸酶可逆抑制剂；
2. 焦磷酸钠（sodiμm pyrophosphate）：丝氨酸/苏氨酸磷酸酶不可逆抑制剂；
3. β-甘油磷酸（β-glycerophosphate）：丝氨酸/苏氨酸磷酸酶可逆抑制剂；
4. 正钒酸钠（sodiμm orthovanadate）：碱性磷酸酶和酪氨酸磷酸酶可逆抑制剂：
5. 钼酸钠（sodiμm molybdate）：酸性磷酸酶不可逆抑制剂；
6. 二水酒石酸钠（sodiμm tartrate dihydrate）：酸性磷酸酶可逆抑制剂；
7. 咪唑（imidazole）：碱性磷酸酶可逆抑制剂。
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