在使用Teledyne ISCO的CombiFlash®系统时，或者在纯化没有色团的化合物时，可以使用薄层色谱法（TLC）来定位收集到的馏分中的纯化化合物。
如果已知化合物的保留因子（Rf），则可以根据柱体积估计含有所需物质的馏分收集管。柱体积是装填柱的空隙（空余）体积。这一规格在所有RediSep®色谱柱的色谱应用说明3中都有列出。
了解Rf和柱体积可以让您大致了解化合物可能位于哪些馏分收集管的范围。
二、一般方法
将待分离的化合物加载到TLC板上，并分离成几个种类。
控制参数
TLC的几个参数必须保持一致以获得良好的相关性。
• TLC溶剂应以体积比的方式量取，以便混合物在转移到梯度生成系统时保持恒定。
• 为了获得最佳结果，建议对层析室和板进行平衡。
• 推荐将板运行至距离板顶部1-4厘米以内，以实现良好的分离。
• 在运行板之前，应标记样品斑点位置和溶剂水平。
• 应在运行结束时标记溶剂洗脱高度和样品斑点位置。
• 在进行TLC时，层析室中的溶剂水平绝不能触及样品，并且应覆盖层析室以维持气相中的平衡。
假设
有几个假设：
• 色谱柱和TLC板使用相同类型的固定相。
• TLC方法中使用的溶剂与液体分离中使用的溶剂相同。
因此，液体分离必须是等度洗脱。
• TLC的Rf应小于0.5且大于0.1，如果不是这样，则可能需要不同的溶剂系统。
Rf值
Rf — 保留因子。样品斑点移动的距离。Rf通过以下公式计算：
Zx — 斑点从其起始点（样品线）移动的距离。请参考图1和图2。
Zf — 从原始溶剂线到最终溶剂前沿的距离。
Z0 — 从溶剂线到样品线的距离。
图1：TLC起始
图2：TLC完成
柱体积相关性
一旦知道了混合物中某个组分的Rf，就可以与柱体积（CV）建立相关性。
如果Rf值在0.1和0.5之间，它可以被输入到以下公式中，以给出收集管的范围。
其中：
Volc — 柱的空隙体积。
Volf — 每个管中收集的馏分体积。
三、示例
请参考图3。
图3：TLC示例
一个丙酮斑点洗脱了62毫米（Zx=62毫米），溶剂水平到水平样品线的距离是8毫米（Z0=8毫米），溶剂前沿移动的距离是170毫米（Zf=170毫米）。Rf是无量纲的，所以单位被省略，进行计算：
为了将这与通过柱体积为16.8 mL的12克RediSep柱进行的纯化相关联，并收集为10 mL的馏分，将Rf应用到以下公式中：
四、计算机
人们可以轻松使用Microsoft® Excel®或其他电子表格程序来创建Rf和试管相关性计算器：
图4：Rf和试管相关性计算器
五、参考
Colin F. Poole and Salwa K. Poole, “Chromatography Today”, Elsevier Science Publishers B.V., 649-667, (1991).
