在完成了小鼠淋巴瘤细胞EL4的基本准备与复苏步骤后，接下来是细胞培养的关键阶段。首先，将复苏后的EL4细胞悬液轻轻吹打均匀，以避免细胞团块的形成，这有助于细胞在培养环境中的均匀分布和生长。随后，使用台盼蓝染色法检测细胞活力，确保大部分细胞保持活性，为后续的实验提供可靠的细胞基础。
接着，根据实验需求调整细胞密度，通常将细胞悬液稀释至适宜的浓度后，接种至预先准备好的含有培养基（包括RPMI-1640培养基、10%胎牛血清、双抗等）的培养瓶中。注意在接种过程中避免产生气泡，气泡可能会干扰细胞贴壁或造成培养基分布不均。
培养瓶置于37℃、5% CO2的恒温培养箱中培养，这是维持EL4细胞正常生长代谢的必要条件。每日需观察细胞生长情况，包括形态、密度及培养基的颜色变化，以判断是否需要更换新鲜培养基或进行传代培养。一般而言，当细胞密度达到80%-90%时，应进行传代操作，以避免细胞因过度生长而衰老或死亡。
在传代时，首先轻轻吸去旧培养基，加入适量PBS缓冲液洗涤细胞表面，去除残留的培养基和死细胞。然后，加入适量胰酶进行消化，待细胞边缘变圆、轻轻摇晃即可脱落时，立即加入含血清的培养基终止消化。通过轻柔吹打使细胞分散成单细胞悬液，并按需进行传代接种或收集细胞进行后续实验。
通过精心细致的操作和持续的观察，可以确保EL4细胞在体外培养过程中保持稳定的生长状态，为后续的科学研究提供可靠的细胞模型。
