内皮细胞培养基的配方通常包括基础培养基和特定的补充成分。以下是一个常用的内皮细胞培养基配方示例:
基础培养基
Dulbecco'sModifiedEagleMedium(DMEM)或RPMI1640
选择合适的基础培养基,DMEM比较常用。
补充成分
胎牛血清(FetalBovineSerum,FBS)
最终浓度:10%(v/v)
青霉素-链霉素溶液(Penicillin-Streptomycin)
最终浓度:100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素。
内皮生长因子(EndothelialGrowthFactor,EGF)
最终浓度:10-20ng/mL。
血管内皮生长因子(VascularEndothelialGrowthFactor,VEGF)
最终浓度:10-50ng/mL。
转化生长因子β(TransformingGrowthFactor-beta,TGF-β)
最终浓度:1-10ng/mL(可选)。
其他添加剂(可根据需要选择):
生长因子(如FGF,基本成纤维生长因子)、胰岛素、氨基酸等。
配制步骤
准备基础培养基:根据需要取适量的DMEM或RPMI1640。
添加胎牛血清:加入FBS,轻轻混合均匀。
添加抗生素:加入青霉素-链霉素溶液,混合均匀。
添加生长因子:按照上述浓度分别添加EGF、VEGF、TGF-β等生长因子。
调节pH:确保培养基的pH在7.2-7.4之间,可以使用盐酸或氢氧化钠进行调节。
过滤灭菌:使用0.22μm过滤器进行灭菌,以去除微生物。
存储条件
配制好的培养基应存放在4°C冰箱中,避免反复冻融,建议使用时分装。
请根据实验需要调整成分及其浓度,并遵循相关的操作规程和安全指南。