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2024/10/16 10:42:23要复苏RAW264.7巨噬细胞,首先需要将含有1 mL细胞悬液的冻存管从液氮中取出并快速解冻于37℃水浴中,然后将其转移到1 mL新鲜培养基的无菌管中,并ce底混合均匀。
接下来,使用1000 rpm的离心速度离心5分钟,将上清液倒掉,随后再加入1 mL培养基并充分重悬细胞。
将悬液加入含有适量培养基的培养皿或瓶中(10ml/10 cm皿),并将其放置在培养箱中过夜培养(37℃,5% CO2)。第二天检查细胞的生长状态和密度,以确定是否需要进行传代操作。通过这些步骤,可以有效地复苏RAW264.7巨噬细胞,并为其后续培养提供良好的基础。
RAW 264.7细胞的详细复苏具体步骤一
【准备工作】
水浴锅:预热至37℃。
培养基:提前复温至室温或37℃。
离心机:设置好转速(通常为1000 rpm)。
RAW 264.7细胞的详细复苏具体步骤二
【解冻细胞】
取出细胞:从液氮罐中取出冻存管,观察管内无液氮的情况下,捏住管盖。
水浴解冻:将冻存管迅速浸入37℃的水浴锅中,轻轻摇晃,直到细胞融化至米粒大小的冰块时终止水浴,整个过程不超过2分钟。
RAW 264.7细胞的详细复苏具体步骤三
【离心和重悬】
离心:将解冻后的细胞悬液转移至离心管,以1000 rpm离心3分钟,弃去上清液。
重悬:加入预热的培养基,轻柔重悬细胞。
RAW 264.7细胞的详细复苏具体步骤四
【接种和培养】
接种:将重悬后的细胞悬液接种到新的培养瓶中,轻轻混匀。
培养:将培养瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中培养。
观察:复苏24小时后,观察细胞的贴壁情况,确保细胞健康生长。
【注意事项】
快速操作:整个复苏过程应尽可能在5-10分钟内完成,以确保细胞的高存活率。
防护措施:在水浴解冻时,使用一次性PE手套包住冻存管,避免直接接触水源,防止污染。
细胞状态:定期观察细胞形态,确保细胞处于健康状态。
通过以上步骤,研究人员可以有效地复苏RAW 264.7细胞,确保其在后续实验中的良好状态。
培养基:中科百抗RPMI1640,DMEM培养基
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