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2024/10/16 11:06:54一、传代培养
传代培养是指需要将培养物分割成小的部分,重新接种到另外的培养器皿(瓶)内,再进行培养的过程。对单层培养而言,80%汇合或刚汇合的细胞是较理想的传代阶段。传代培养中的细胞传代培养(subculture),当原代培养成功以后,随着培养时间的延长和细胞不断分裂,一则细胞之间相互接触而发生接触性抑制,生长速度减慢甚至停止;另一方面也会因营养物不足和代谢物积累而不利于生长或发生中毒。
二、RAW264.7细胞传代步骤
在进行RAW264.7细胞传代时,首先需要将旧培养基弃去,并使用PBS洗涤细胞1-2次,确保细胞表面干净。然后向培养瓶中加入2 mL PBS,使其浸润所有细胞,轻轻吹打细胞以将其吹下,将细胞悬液收集至无菌离心管中。使用1000 rpm的离心速度离心5分钟,弃去上清液,再加入1-2 mL培养基并充分重悬细胞。
接下来,将悬液按1:2的比例进行传代至新的培养皿或培养瓶中,并将其置于培养箱中进行培养。通过这些步骤,可以有效地进行RAW264.7细胞的传代操作,促进细胞的增殖和持续生长,以维持细胞系的活力和稳定性。传代是细胞培养中的重要步骤,有助于确保RAW264.7细胞在研究中的连续性和稳定性。
三、RAW264.7细胞冻存具体步骤
1. 首先需要收集细胞并将其转移至无菌离心管中。使用1000 rpm的离心速度离心5分钟,将上清液弃去。
2. 随后,向细胞中添加1 ml细胞冻存液(包含20% FBS的培养基和10% DMSO),轻轻吹打混匀,将1 ml细胞悬液吸取至冻存管中,并做好详细的标记。
3. 将冻存管置于梯度降温冻存盒中,并将其放入-80℃冰箱中过夜,确保冷冻过程缓慢进行。
4. 随后,将已冻存的细胞转移至液氮罐中进行长期储存,以确保细胞的保存和使用。通过这些步骤,可以有效地进行RAW264.7巨噬细胞的冻存,以供日后实验或应急需求使用。
四、推荐使用产品
冻存液推荐:WAKO无血清冻存液
实验中会用到的PBS推荐: