可见分光光度法
植物总酚（TP）含量检测试剂盒说明书 货号：YJS2309
规格：50T/24S
产品内容：
提取液：60%乙醇， 自备。
试剂一：液体 20mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体 25mL×1 瓶，4℃保存。
标准品：液体 1mL×1 支，4℃保存。1mg/mL 单宁酸标准溶液。
产品说明：
植物酚类物质具有清除自由基，抗氧化抗衰老的作用，具有较高的营养价值和医疗保健作用而 广泛应用于化妆品、食品、医药等领域。
在碱性条件下，酚类物质将钨钼酸还原，产生蓝色化合物，在 760nm 处有特征吸收峰，测 760nm 处的吸光值，即可得样品总酚含量。
自备实验用品及仪器：
天平、烘箱、粉碎仪、筛子、超声破碎仪、60%乙醇、离心机、可见分光光度计、1 mL 玻璃比 色皿、蒸馏水。
操作步骤：
一、总酚提取
将样本烘干至恒重，粉碎，过 40 目筛之后，称取约 0. 1g ，加入 2.5mL 提取液，用超声提取法进 行提取，超声功率 300W ，破碎 5s ，间歇 8s ，60℃ , 提取 30min 。12000rpm ，25℃ , 离心 10min ， 取上清，用提取液定容至 2.5mL ，待测。
二、标准品制备：
将 1mg/mL 单宁酸标准溶液二倍稀释至 0.3125、0.1562、0.0781、0.0391、0.0195、0.0098、0.0049、 0.0024 、0.0012 、0.0006mg/mL ，待测。
三、测定操作表
1 、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 760nm ，蒸馏水调零。
2 、操作表
对照管 | 测定管 | 标准管 | 空白管 | |
样本待测液 ( μL） | 50 | 50 | - | |
标准液 ( μL） | 50 | |||
蒸馏水 ( μL） | 50 | |||
试剂一 ( μL） | - | 250 | 250 | 250 |
混匀，室温静置 2min | ||||
试剂二 ( μL） | 250 | 250 | 250 | 250 |
蒸馏水 ( μL） | 700 | 450 | 450 | 450 |
混匀，室温静置 10 min， 1mL 比色皿，测定 760nm 吸光值。 | ||||
空白管只测一次。
四、总酚含量计算
1 、标准曲线绘制：
以不同浓度的单宁酸为 x 轴，ΔA（A 标准-A 空白）为 y 轴绘制标准曲线 y= kx+b。
2 、植物总酚含量计算：
将ΔA=A 测定-A 对照带入标准曲线，求 x(mg/mL)。
（1） 按样本鲜重计算
总酚含量（mg/g 鲜重）= x×V 提取÷W= 2.5x÷W （2） 按样本
蛋白浓度计算
总酚含量（mg/mg prot）= x×V 提取÷（V 提取×Cpr）= x ÷Cpr
V 提取：提取液体积，2.5 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g。
注意事项：
（1）OD 值大于 1.0 ，样品适当稀释再测定，注意计算公式里乘以稀释倍数。
（2）试剂一对皮肤有一定的刺激性，请操作时做好防护措施。
本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！
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