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内毒素污染

内毒素，又称脂多糖（LPS），是革兰氏阴性细菌的主要细胞壁成份。内毒素的来源包括培养基、血清、水、缓冲溶液和其他细胞培养试剂，如胰蛋白酶。内毒素是体内外炎症反应的有效诱导剂。内毒素污染是细胞培养和生产注射药物中的主要问题。溶液和试剂可能是无菌但仍含有细菌成分，因此监测细胞培养试剂中是否存在内毒素至关重要。

注意：“内毒素”有时候用于描述细菌其他组成部分（如鞭毛蛋白），但在细菌学中它仅指脂多糖。

LPS的基本结构

常见的内毒素污染源？

水 — 使用高纯度水制备培养基和溶液，清洁玻璃器皿。

玻璃器皿 — 为了消除内毒素，必须将玻璃器皿加热至250°C维持≥30分钟，或加热到180°C维持 3 小时1。

培养液、血清和添加剂 — 使用前要求制造商提供内毒素水平认证或测试。

塑料容器 — 要求制造商提供内毒素水平和无致热源的证明。

让 InvivoGen 保障您的安全 ！所有InvivoGen的试剂都经过彻-底测试，以确保不存在细菌污染，包括内毒素。

我的实验有什么风险？

内毒素在体外和体内实验均可引起显著的不稳定性。脂质A部分能够激活细胞表面或内体的Toll样受体4（TLR4），诱导MAP激酶（MAPK）、NF-κB和IRF（干扰素调节因子）通路的激活。尽管内毒素的作用随浓度和细胞类型的不同而改变，但它们确实可以改变细胞形态、影响增殖和转染效率。此外，LPS还诱导了炎性细胞因子如TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8和IL-18的产生，并激活caspase 4/5/11-NLRP3 非经典炎症小体，导致细胞焦亡。

在体内实验，低内毒素浓度可刺激免疫系统，而高浓度可引起发烧、低血压、多器官衰竭，甚至死亡。

内毒素在体内外的主要影响

1. Gorbet MB. & Sefton MV., 2005., 2. Leider, R. et al. 2013., 3. Nims, RW. & Price PJ. 2017., 4. Rathinam VAK. et al., 2019

生物试剂内毒素检测

HEK-Blue™ LPS 检测试剂盒 2

基于细胞的比色法分析

• 用途广泛：适用于几乎所有的生物试剂

• 高灵敏度：检测限为0.01 EU/ml

• 经济实惠：1个试剂盒最多可进行500次测试

HEK-Blue™ LPS 检测试剂盒2的原理

试剂盒依赖于InvivoGen专有的HEK-Blue™-4细胞，该细胞稳定表达人源TLR4和一个NF-κB诱导的分泌型胚胎碱性磷酸酶（SEAP）报告基因。

简单的实验程序使该试剂盒成为常规测试的理想选择。只要样品中含有微量的LPS，在与HEK-Blue™-4细胞孵育过夜后，会导致NF-κB的激活和SEAP报告基因的表达。培养上清液中的SEAP活性通过加上底物QUANTI-Blue™溶液，并使用分光光度计在620-655 nm的波长测量。吸光度与内毒素含量成正比。使用试剂盒中提供的HEK-Blue™内毒素标准品，经系列稀释获得标准曲线从而计算内毒素浓度（大肠杆菌055:B5 LPS的制备参照FDA批准的内毒素工作标准品（CSE）制备标准）。HEK-Blue™ LPS检测试剂盒2 在InvivoGen公司内部用作常规检测。

使用该试剂盒的5大原因

1.替代昂贵而耗时的鲎试剂（LAL）。

购买此套件一次，冻存HEK-Blue™-4细胞，以后只需重新订购其他耗材。

2.与LAL分析不同，如果样品含有(1,3)-β-D-葡聚糖，使用HEK-Blue™-4细胞进行LPS检测不会导致假阳性。

3.适用于所有生物样品，包括培养基、血清、化学制剂和疫苗佐剂。

4.溶液颜色从粉红色变为紫/蓝色表示 阳性反应，结果简单可视。

5.包括一本实验程序小册子，计算内毒素浓度的方法，以及疑难排解部分。

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